類彈性-膠原復(fù)合蛋白及其修飾超氧化物歧化酶的研究.pdf

1、類彈性蛋白是一類人工設(shè)計(jì)合成的蛋白多肽，具有良好的生物相容性，低免疫源性等生物學(xué)性能，并且廣泛用于蛋白質(zhì)的分離純化以及藥物緩釋。本課題基于本實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)合成的疏水性類彈性蛋白ELP的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)合成了一段親水性的類人膠原蛋白多肽CLP，并通過酶切連接構(gòu)建出了不同長度的類人膠原蛋白多肽基因CLPn。將單倍體CLP1與三倍體CLP3分別與類彈性蛋白ELP進(jìn)性無縫拼接，最終得到了疏水性與親水性片段占有不同比例的復(fù)合蛋白ELP-CLP1與ELP-

2、CLP3基因，并通過連接表達(dá)載體轉(zhuǎn)入大腸桿菌表達(dá)菌表達(dá)復(fù)合蛋白ELP-CLP1、ELP-CLP3。利用ELP的相變性質(zhì)對復(fù)合蛋白進(jìn)行純化。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明疏水性類彈性蛋白片段與親水性膠原蛋白片段比為1∶1時(shí)，復(fù)合蛋白ELP-CLP1自組裝結(jié)構(gòu)為直徑約1μm左右的微球結(jié)構(gòu)，疏水性類彈性蛋白片段與親水性膠原蛋白片段比為1∶3時(shí)，復(fù)合蛋白ELP-CLP3自組裝結(jié)構(gòu)為立體相互連接的疏松網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)。這些自組裝結(jié)構(gòu)都受到溫度、pH等因素的影響。此外，將超