大鼠急性應(yīng)激后左心室交感神經(jīng)系統(tǒng)變化.pdf

1、目的：通過急性束縛（Immobilization，IMO）應(yīng)激建立大鼠應(yīng)激性心肌?。╯tressinducedcardiomyopathy，SIC）模型，觀察（1）應(yīng)激后心臟功能和形態(tài)變化、左心室不同部位心肌組織損傷改變及交感神經(jīng)活性指標(biāo)—心率變異率的變化；（2）急性應(yīng)激后大鼠左心室交感神經(jīng)系統(tǒng)，包括心臟交感神經(jīng)節(jié)中去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（norepinephrinetransporter，NET）、交感神經(jīng)酪氨酸羥化酶（tyrosine

2、hydroxylase，TH）及β-腎上腺素能受體（β-adrenergicreceptorsubtypes）不同亞型,在左心室不同部位表達(dá)及分布情況及急性應(yīng)激后左心室交感神經(jīng)系統(tǒng)變化在SIC中的作用和意義。
　　方法：
　　1、造模：大鼠隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組（Immobilization，IMO）和對照組（Sham），IMO乙醚麻醉后迅速固定于鼠臺(tái)上，背部束縛；Sham0.35mg/g水合氯醛腹腔注射，大鼠完全麻醉后固定于鼠臺(tái)上

3、。頸部0.5ml利多卡因局麻后，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，0.4F聚乙烯管經(jīng)頸動(dòng)脈插入左心室。
　　2、心電圖及心室內(nèi)壓：powerlab多導(dǎo)生理記錄儀監(jiān)測心電圖和心室內(nèi)壓變化，并用powerlab自帶模塊對心電圖心率變異率進(jìn)行測量。
　　3、超聲心動(dòng)圖：超聲心動(dòng)儀，探頭頻率12MHz，心尖長軸切面檢測左心室形態(tài)。
　　4、血漿cTnI及NE檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿中cTnI及NE濃度。
　　5、HE染色：將固定

4、好的左室取出，按心尖部、心室中部及心底部的順序?qū)⒆笫业确譃?個(gè)部分，進(jìn)行脫水-包埋-切片等操作，蘇木素-伊紅染色后鏡下觀察炎性細(xì)胞浸潤（每個(gè)組織片，40×高倍鏡下隨機(jī)選擇5視野，計(jì)數(shù)炎性細(xì)胞）、及心肌組織損傷變化。
　　6、免疫組化：觀察左心室不同部位TH、NET、β1及β2AR表達(dá)和分布情況
　　7、westernblot：檢測左心室TH、NET、β1及β2AR的表達(dá)。
　　8、RT-PCR：觀察交感神經(jīng)節(jié)中NET及

5、心肌中β1、2、3ARmRNA表達(dá)變化情況。
　　結(jié)果：
　　1、與Sham相比，IMO大鼠心率明顯增快，QT間期及QTc明顯延長，Q波加深，R波波幅減小。IMO大鼠ST段2只壓低，8只抬高，3只變化不明顯。實(shí)驗(yàn)過程中IMO大鼠2只死亡，死亡率15.38％，Sham無死亡。
　　2、心率變異率與Sham相比VLF、NN50、LF明顯降低，SDNN、RMSSD、HF及LF/HF輕度降低。
　　3、超聲心動(dòng)圖心尖長軸

6、切面可見IMO大鼠左心室收縮期心尖部呈近似球形擴(kuò)張。
　　4、與Sham相比，IMO大鼠左室收縮壓、+dp/dt顯著升高（P<0.05），舒張末期壓、-dp/dt降低（P<0.05），左室舒張壓無差異。
　　5、血漿NE水平變化：與Sham比實(shí)驗(yàn)30minIMONE顯著升高（P<0.01），2h時(shí)差異消失。IMOcTnI30min時(shí)即較Sham有顯著差異（P<0.05），2h時(shí)差異更明顯（P<0.01)。
　　6、HE

7、染色可見IMO心底部細(xì)胞核計(jì)數(shù)較Sham顯著升高，中部與心尖部無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可見心肌炎性細(xì)胞聚集，心尖部片狀心肌壞死，中部、底部心肌細(xì)胞水腫。
　　7、免疫組化：從心尖部到心底部IMO和Sham組TH的表達(dá)均逐漸增加，Sham心底部表達(dá)高于心尖部（P<0.05），IMO無此差異，心尖部IMO較Sham升高（P<0.05），心臟中部和底部無差異。從心尖部到心底部IMO和ShamNET的表達(dá)均呈上升趨勢，但各組間及不同部位之間比較均無

8、明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。β1ARIMO從心尖部到心底部逐漸升高，Sham逐漸降低，心尖部IMO較Sham降低（P<0.05），中部及底部無差異。β2AR變化與β1AR相似，心尖部IMO較Sham降低（P<0.05）。
　　8、westernbolt：TH、NETIMO與Sham無明顯差異，β1AR較Sham降低（P<0.05），β2AR較Sham升高（P<0.05）。
　　9、RT-PCR：IMO交感神經(jīng)節(jié)中NETmRNA較Sham

9、平均升高13.51倍，心肌組織中β1ARmRNA較Sham平均升高0.39倍，β2ARmRNA平均升高8.54倍，β3ARmRNA平均升高1.50倍。
　　結(jié)論：
　　1、束縛應(yīng)激可誘發(fā)大鼠SIC，心肌組織損傷嚴(yán)重程度與局部心臟交感神經(jīng)激活關(guān)系密切，束縛誘發(fā)SIC時(shí)存在自主神經(jīng)平衡變化—迷走神經(jīng)活性降低；
　　2、左心室NET分布與交感神經(jīng)分布變化不同，在左心室呈心底至心尖部較為均勻的分布，可能對維持心肌β-AR表達(dá)穩(wěn)