大鼠急性應激后左心室交感神經(jīng)系統(tǒng)變化.pdf

1、目的：通過急性束縛（Immobilization，IMO）應激建立大鼠應激性心肌?。╯tressinducedcardiomyopathy，SIC）模型，觀察（1）應激后心臟功能和形態(tài)變化、左心室不同部位心肌組織損傷改變及交感神經(jīng)活性指標—心率變異率的變化；（2）急性應激后大鼠左心室交感神經(jīng)系統(tǒng)，包括心臟交感神經(jīng)節(jié)中去甲腎上腺素轉運蛋白（norepinephrinetransporter，NET）、交感神經(jīng)酪氨酸羥化酶（tyrosine

2、hydroxylase，TH）及β-腎上腺素能受體（β-adrenergicreceptorsubtypes）不同亞型,在左心室不同部位表達及分布情況及急性應激后左心室交感神經(jīng)系統(tǒng)變化在SIC中的作用和意義。
　　方法：
　　1、造模：大鼠隨機分為實驗組（Immobilization，IMO）和對照組（Sham），IMO乙醚麻醉后迅速固定于鼠臺上，背部束縛；Sham0.35mg/g水合氯醛腹腔注射，大鼠完全麻醉后固定于鼠臺上

3、。頸部0.5ml利多卡因局麻后，分離右側頸總動脈，0.4F聚乙烯管經(jīng)頸動脈插入左心室。
　　2、心電圖及心室內壓：powerlab多導生理記錄儀監(jiān)測心電圖和心室內壓變化，并用powerlab自帶模塊對心電圖心率變異率進行測量。
　　3、超聲心動圖：超聲心動儀，探頭頻率12MHz，心尖長軸切面檢測左心室形態(tài)。
　　4、血漿cTnI及NE檢測：采用酶聯(lián)免疫吸附法檢測血漿中cTnI及NE濃度。
　　5、HE染色：將固定

4、好的左室取出，按心尖部、心室中部及心底部的順序將左室等分為3個部分，進行脫水-包埋-切片等操作，蘇木素-伊紅染色后鏡下觀察炎性細胞浸潤（每個組織片，40×高倍鏡下隨機選擇5視野，計數(shù)炎性細胞）、及心肌組織損傷變化。
　　6、免疫組化：觀察左心室不同部位TH、NET、β1及β2AR表達和分布情況
　　7、westernblot：檢測左心室TH、NET、β1及β2AR的表達。
　　8、RT-PCR：觀察交感神經(jīng)節(jié)中NET及

5、心肌中β1、2、3ARmRNA表達變化情況。
　　結果：
　　1、與Sham相比，IMO大鼠心率明顯增快，QT間期及QTc明顯延長，Q波加深，R波波幅減小。IMO大鼠ST段2只壓低，8只抬高，3只變化不明顯。實驗過程中IMO大鼠2只死亡，死亡率15.38％，Sham無死亡。
　　2、心率變異率與Sham相比VLF、NN50、LF明顯降低，SDNN、RMSSD、HF及LF/HF輕度降低。
　　3、超聲心動圖心尖長軸

6、切面可見IMO大鼠左心室收縮期心尖部呈近似球形擴張。
　　4、與Sham相比，IMO大鼠左室收縮壓、+dp/dt顯著升高（P<0.05），舒張末期壓、-dp/dt降低（P<0.05），左室舒張壓無差異。
　　5、血漿NE水平變化：與Sham比實驗30minIMONE顯著升高（P<0.01），2h時差異消失。IMOcTnI30min時即較Sham有顯著差異（P<0.05），2h時差異更明顯（P<0.01)。
　　6、HE

7、染色可見IMO心底部細胞核計數(shù)較Sham顯著升高，中部與心尖部無統(tǒng)計學差異，可見心肌炎性細胞聚集，心尖部片狀心肌壞死，中部、底部心肌細胞水腫。
　　7、免疫組化：從心尖部到心底部IMO和Sham組TH的表達均逐漸增加，Sham心底部表達高于心尖部（P<0.05），IMO無此差異，心尖部IMO較Sham升高（P<0.05），心臟中部和底部無差異。從心尖部到心底部IMO和ShamNET的表達均呈上升趨勢，但各組間及不同部位之間比較均無

8、明顯統(tǒng)計學差異。β1ARIMO從心尖部到心底部逐漸升高，Sham逐漸降低，心尖部IMO較Sham降低（P<0.05），中部及底部無差異。β2AR變化與β1AR相似，心尖部IMO較Sham降低（P<0.05）。
　　8、westernbolt：TH、NETIMO與Sham無明顯差異，β1AR較Sham降低（P<0.05），β2AR較Sham升高（P<0.05）。
　　9、RT-PCR：IMO交感神經(jīng)節(jié)中NETmRNA較Sham

9、平均升高13.51倍，心肌組織中β1ARmRNA較Sham平均升高0.39倍，β2ARmRNA平均升高8.54倍，β3ARmRNA平均升高1.50倍。
　　結論：
　　1、束縛應激可誘發(fā)大鼠SIC，心肌組織損傷嚴重程度與局部心臟交感神經(jīng)激活關系密切，束縛誘發(fā)SIC時存在自主神經(jīng)平衡變化—迷走神經(jīng)活性降低；
　　2、左心室NET分布與交感神經(jīng)分布變化不同，在左心室呈心底至心尖部較為均勻的分布，可能對維持心肌β-AR表達穩(wěn)