腦卒中后交感神經(jīng)激活對(duì)單核吞噬系統(tǒng)的調(diào)控.pdf

1、研究背景:感染是腦卒中最常見(jiàn)的并發(fā)癥之一，嚴(yán)重影響卒中患者康復(fù)，增加病死率。近期研究表明高發(fā)的感染率可能與卒中后交感神經(jīng)激活導(dǎo)致的機(jī)體細(xì)胞免疫抑制有關(guān)。為更好地了解中樞神經(jīng)系統(tǒng)與免疫系統(tǒng)之間的復(fù)雜關(guān)系，也為急性卒中患者尋找更有效的治療方法，本研究首先建立局灶性腦缺血再灌注大鼠模型，以6-羥基多巴胺（6-hydroxydopamine，6-OHDA）阻斷交感神經(jīng)，觀察交感神經(jīng)對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠單核巨噬細(xì)胞免疫功能的影響。
　　

2、目的:探討交感神經(jīng)對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠細(xì)胞免疫功能的影響。
　　方法:將成年雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字法分成實(shí)驗(yàn)組(6-OHDA+MCAO)、對(duì)照組(MCAO)和假手術(shù)組（Sham）。采用血管內(nèi)線栓法制作大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)再灌注模型，大腦中動(dòng)脈閉塞時(shí)間為90分鐘。實(shí)驗(yàn)組在做缺血再灌注模型前需連續(xù)3天腹腔注射6-羥基多巴胺阻斷交感神經(jīng)。造模后1天、3天、

3、7天、14天采用Longa評(píng)分法進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分;采用7.0T小動(dòng)物核磁共振儀檢測(cè)腦梗死容積;采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)外周血單核巨噬細(xì)胞、肺泡灌洗液中單核巨噬細(xì)胞及脾臟單核巨噬細(xì)胞表面MHCⅡ分子表達(dá);采用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)測(cè)定LPS刺激后大鼠單核巨噬細(xì)胞釋放促炎細(xì)胞因子TNF-α、IFN-γ的水平;Western Blotting法測(cè)定術(shù)后3天單核巨噬細(xì)胞中β

4、-arrestins和NF-κB蛋白的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1、各時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分、腦梗死容積無(wú)差異(p＞0.05)。
　　2、外周血、肺泡灌洗液及脾臟的單核巨噬細(xì)胞表面MHCⅡ類分子表達(dá):在多數(shù)時(shí)間點(diǎn)實(shí)驗(yàn)組表達(dá)明顯高于對(duì)照組(p＜0.05)，低于假手術(shù)組。
　　3、LPS刺激后各組大鼠肺泡巨噬細(xì)胞及脾臟的巨噬細(xì)胞TNF-α和IFN-γ的表達(dá):實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組TNF-α和IFN-γ的走勢(shì)相

5、似，均在第1天最高，高于假手術(shù)組水平，隨后下降，3天達(dá)到最低，低于假手術(shù)組(p＜0.05)，以后緩慢回升，14天后對(duì)照組仍低于假手術(shù)組，實(shí)驗(yàn)組基本達(dá)到假手術(shù)組水平。實(shí)驗(yàn)組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)TNF-α和IFN-γ的值均高于對(duì)照組，3天時(shí)兩組差異最明顯(p＜0.05)。
　　4、3天時(shí)肺泡灌洗液、脾臟巨噬細(xì)胞內(nèi)β-arrestin2和NF-κB的表達(dá):實(shí)驗(yàn)組肺泡巨噬細(xì)胞及脾臟巨噬細(xì)胞內(nèi)β-arrestin2表達(dá)較對(duì)照組有明顯降低，差異都有統(tǒng)計(jì)