星形膠質(zhì)細胞移植促進小鼠脊髓損傷后軸突再生和運動功能恢復.pdf

1、目的：NPC-Astro和Olig2PC-Astro是采用基因敲入技術(shù)（knock in）從人的胚胎干細胞（hESCs）誘導分化而來的兩種新型的未成熟星形膠質(zhì)細胞，小鼠脊髓T10全橫斷后在損傷處分別移植這兩種星形膠質(zhì)細胞，研究細胞移植對損傷區(qū)域形成的作用；對損傷兩側(cè)神經(jīng)元存活的影響；觀察細胞移植對脊髓上、下行投射神經(jīng)軸突再生的作用；對神經(jīng)環(huán)路的重建和對后肢運動功能恢復的作用；同時也為進一步探究NPC-Astro和Olig2PC-Astr

2、o這兩種星形膠質(zhì)細胞的特性提供一定的線索。
　　方法：首先體外培養(yǎng)NPC-Astro和Olig2PC-Astro，運用細胞免疫熒光鑒定這兩種星形膠質(zhì)細胞，觀察兩種細胞在培養(yǎng)狀態(tài)下的形態(tài)和差別。對6-8周齡的C57BL/6小鼠做脊髓 T10節(jié)段的全橫斷模型，脊髓損傷后一天在損傷處分別移植這兩種細胞。損傷后四周取材冰凍切片，運用免疫熒光染色觀察 NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后的存活、分布、與宿主組織的整合以及向損

3、傷頭端和損傷尾端的遷移情況。損傷后四周進行感覺神經(jīng)軸突的標記。損傷后六周取材切片，運用免疫熒光染色研究細胞移植對損傷區(qū)域形成的作用、對損傷兩側(cè)神經(jīng)元的保護作用和對感覺神經(jīng)軸突再生的作用。損傷后十周運用免疫熒光染色研究細胞移植對不同類型神經(jīng)軸突再生的作用以及再生軸突與損傷尾端的神經(jīng)元有無突觸重建。小鼠脊髓損傷后定期進行曠場實驗，運用BMS評分評估后肢運動功能的恢復情況
　　結(jié)果：NPC-Astro和Olig2PC-Astro在培養(yǎng)狀

4、態(tài)下都表達星形膠質(zhì)細胞的標記物GFAP和S100β，都可以用hM抗體進行體外和在體的標記，兩種細胞在培養(yǎng)狀態(tài)下形態(tài)存在一定的差別；細胞移植后4周可見兩種星形膠質(zhì)細胞在脊髓損傷處大量存活并與宿主組織整合在一起，移植的細胞可以向損傷頭端和尾端進行遷移；與對照組相比，NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后損傷區(qū)域面積顯著減??；兩種細胞對損傷兩側(cè)的神經(jīng)元有顯著的保護作用，其中Olig2PC-Astro的神經(jīng)元保護作用強于NPC-A

5、stro；neurofilament抗體免疫熒光染色表明損傷頭端和尾端都有神經(jīng)軸突再生進入損傷區(qū)域，部分神經(jīng)軸突甚至穿過損傷區(qū)域到達損傷對側(cè)；我們還觀察到了脊髓損傷后上行的感覺神經(jīng)軸突和下行的5-HT能神經(jīng)軸突可以再生，再生的5-HT能神經(jīng)軸突可以穿過損傷區(qū)域并且與損傷尾端多種類型的神經(jīng)元形成新的突觸聯(lián)系；曠場實驗顯示細胞移植小鼠后肢的運動功能得到了恢復。
　　結(jié)論：NPC-Astro和Olig2PC-Astro移植后大量存活，與