骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植聯(lián)合FK506對(duì)大鼠脊髓損傷后功能恢復(fù)及脊髓再生的研究.pdf

1、目的： 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSC)體外培養(yǎng)，將其局部注射于脊髓損傷一周后大鼠脊髓的遠(yuǎn)近端，同時(shí)應(yīng)用免疫抑制藥物他克莫司(FK506)，觀察兩者對(duì)脊髓損傷后再生的影響；初步探討FK506的對(duì)脊髓損傷后的再生作用。 方法： 取1月齡SD大鼠(雌雄不限)經(jīng)拉頸椎法處死，無菌條件下取出雙側(cè)股骨和脛骨，剪開兩端髓腔，將骨髓腔內(nèi)的骨髓沖出至無菌平皿，制成細(xì)胞懸液，置于培養(yǎng)箱中，3天后首次換液，倒置相差顯微鏡下逐日觀察細(xì)胞的

2、形態(tài)，貼壁情況及生長(zhǎng)情況。經(jīng)多次傳代擴(kuò)增培養(yǎng)，使rBMSC逐漸得到純化和擴(kuò)增。 鉗夾法制作大鼠急性脊髓損傷動(dòng)物模型30只，以傷后后肢強(qiáng)烈痙攣和尾巴旋轉(zhuǎn)一周為入選標(biāo)準(zhǔn)，隨機(jī)分成3組。A組為單純損傷組，B組為單純骨髓干細(xì)胞移植組，C組為骨髓干細(xì)胞聯(lián)合FK506組。B、C兩組一周后再次手術(shù)，暴露出原脊髓損傷處，將體外培養(yǎng)的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞用微量注射器分別于損傷遠(yuǎn)近端注入脊髓損傷區(qū)域，C組同時(shí)腹腔注射FK506一次。期間加強(qiáng)動(dòng)物的護(hù)理，

3、于傷后1w、2w、4w、6w、8w采用BBB評(píng)分及斜板實(shí)驗(yàn)觀察神經(jīng)恢復(fù)情況。8周后取材，行免疫組化檢查及病理學(xué)檢查。 結(jié)果： B、C兩組大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能均有較明顯的恢復(fù)，B、C組注射細(xì)胞后2周開始出現(xiàn)后肢活動(dòng)，逐步恢復(fù)排尿，傷后4周變化最為明顯，可見明顯后肢活動(dòng)和尾巴的擺動(dòng)，傷后8周，已可見協(xié)調(diào)運(yùn)動(dòng)，C組的恢復(fù)情況較B組為快，BBB最高評(píng)分可達(dá)14分，兩組統(tǒng)計(jì)學(xué)上有差異(P<0.05)。A組亦有所恢復(fù)，但程度較輕。C組與

4、A組在6周以后的評(píng)分有顯著性差異(P<0.01)。A組切片見傷處為瘢痕連接，結(jié)構(gòu)紊亂，鄰近有明顯空洞形成，未見神經(jīng)軸索通過。B、C組亦見瘢痕形成，但可見少量神經(jīng)軸索樣結(jié)構(gòu)。免疫組化顯示：A組傷處鄰近神經(jīng)元胞體NF200陽性細(xì)胞較少，鄰近脊髓組織GFAP陽性細(xì)胞亦較少。B組傷處可見GFAP及NF陽性纖維，但排列較紊亂，無正常結(jié)構(gòu)。C組較B組鄰近脊髓神經(jīng)元胞體NF200陽性細(xì)胞較多，GFAP陽性細(xì)胞亦較多。C組大鼠脊髓損傷邊緣Nogo陽性神