EB病毒感染對(duì)IGF2基因甲基化和印跡表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：明確EBV感染對(duì)胰島素樣生長因子2(insulin-like growth factor2，IGF2)編碼基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化、印跡狀態(tài)及表達(dá)的影響，探討IGF2基因與EBVaGC發(fā)生發(fā)展的關(guān)系。
　　方法:亞硫酸氫鹽基因組測序法(Bisufite genomic sequencing，BGS)檢測EBV陽性和陰性細(xì)胞系以及EBV相關(guān)胃癌(EBV-associated gastric carcinoma，EBVaGC)和EBV

2、陰性胃癌(EBV-negatived gastric carcinoma，EBVnGC)組織中IGF2基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀態(tài)。聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)分析檢測 EBVaGC和EBVnGC及癌旁組織標(biāo)本中IGF2基因印跡狀態(tài)。實(shí)時(shí)熒光定量PCR(Real time quant

3、itative PCR，real time qPCR)檢測EBVaGC和EBVnGC組織中IGF2 mRNA的轉(zhuǎn)錄表達(dá)；免疫組化技術(shù)檢測EBVaGC，EBVnGC及癌旁組織中IGF2蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：①BGS結(jié)果顯示EBV陽性和陰性細(xì)胞系中IGF2基因均為高甲基化；EBVaGC組織平均甲基化率為38.17％，EBVnGC組織平均甲基化率為23.06%，統(tǒng)計(jì)分析顯示EBVaGC組織中IGF2基因啟動(dòng)子甲基化水平明顯高于EBVnG

4、C組織(P<0.05)。②EBVaGC組織中IGF2印跡缺失率為61.3%(61.3%,19/31)；EBVnGC組織中IGF2印跡缺失率為33.3%(33.3%,15/45)。EBVaGC組織中IGF2印跡缺失率高于EBVnGC組織，兩者存在顯著性差異(χ2=5.803，P<0.05)；③EBVaGC和EBVnGC組織中IGF2 mRNA轉(zhuǎn)錄表達(dá)無顯著性差異(P>0.05)。④IGF2蛋白表達(dá)在EBVaGC和EBVnGC組織中無顯著差