流式細(xì)胞儀精子分離及冷凍處理對牛精子生理機(jī)能的影響.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)研究了牛性控冷凍精液生產(chǎn)過程中的精子分離過程和冷凍處理，對牛精子生理機(jī)能的影響，并對比了不同種公牛的精子分離效果；為探索性控冷凍精液受精能力下降的原因，進(jìn)一步改進(jìn)和完善這項(xiàng)技術(shù)奠定基礎(chǔ)。 整個(gè)實(shí)驗(yàn)分為三部分。第一部分采用熒光染色法，對牛新鮮精液、分離精液、常規(guī)凍精和性控凍精的精子活力、頂體完整率、線粒體活性和獲能狀況進(jìn)行檢測，來評價(jià)分離和冷凍處理對牛精子生理機(jī)能的影響。結(jié)果表明：精液體外培養(yǎng)之初，新鮮精液與分離精液組在精子

2、活力(83.5％vs83.7％)、頂體完整率(73.7％vs76.9％)、線粒體活性(75.7％vs78.1％)和獲能(28.7％vs32.9％)上均無顯著差異(P＞0.05)；但體外培養(yǎng)4-6h時(shí)，兩組間出現(xiàn)了顯著性差異(精子活力：61.5％vs54.4％；頂體完整率：51.5％vs43.6％；獲能精子百分率：40.7％vs55.2％)(P＜0.05)。冷凍處理很大程度降低了未分離和分離精液的精子活力(83.5％vs52.7％，83.

3、7％vs46.3％)、頂體完整率(73.7％vs57.0％，76.9％vs53.7％)和線粒體活性(75.7％vs55.7％，78.1％vs47.1％)，同時(shí)顯著增加了獲能精子百分率(28.7％vs41.9％，32.9％vs50.1％)(P＜0.05)。結(jié)論：分離處理對牛精子生理機(jī)能的損傷要小于冷凍處理；但分離處理使精子存活期縮短，對冷凍處理的耐受性降低。 第二部分采用熒光染色法，對流式細(xì)胞儀分離精子過程中的高度稀釋、H3334

4、2染色和分離加壓操作對牛精子生理機(jī)能的影響進(jìn)行檢測。結(jié)果表明：對照組與稀釋組在精子活力(46.3％vs37.8％)、頂體完整率(54.8％vs44.2％)和獲能(41.8％vs53.2％)上均存在顯著性差異(P＜0.05)；分離組與前兩組在所檢測的四個(gè)精子指標(biāo)上存在顯著差異(精子活力：29.0％vs37.8％vs46.3％；頂體完整率：38.0％vs44.2％vs54.8％；線粒體活性：23.5％vs37.0％vs41.1％；獲能精子百

5、分率：62.5％vs53.2％vs41.8％)(P＜0.05)；而H33342染色組與分離組間差異不顯著(精子活力：38.3％vs39.2％；頂體完整率：43.5％vs44.1％；線粒體活性：38.7％vs38.6％；獲能精子百分率：52.0％vs52.1％)(P＞0.05)。結(jié)論：流式細(xì)胞儀分離精子過程中，分離加壓和高度稀釋是造成精子損傷的主要原因，H33342染色對精子生理機(jī)能的影響很小，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。 第三部分對比了四頭荷