腎缺血再灌注損傷模型小鼠炎性反應(yīng)信號(hào)相關(guān)研究.pdf

1、目的：觀察小鼠腎臟缺血再灌注后，各個(gè)時(shí)間組血清中炎性細(xì)胞因子白細(xì)胞介素-1、腫瘤壞死因子-a、粒細(xì)胞巨噬細(xì)胞集落刺激因子、白細(xì)胞介素-6含量和腎臟組織中TLR4 mRNA、TNF-a mRNA、IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和CSF2 mRNA的水平變化，并初步探討 TLR4與各炎性因子信號(hào)在 RIRI過程中的作用及相關(guān)機(jī)制。
　　方法：建立小鼠腎缺血再灌注損傷模型(使健康雄性 C57BL/6小鼠雙側(cè)腎臟血供中斷45分鐘

2、，松開夾子使雙腎血流重新灌注)。設(shè)立正常對(duì)照(N)組、假手術(shù)(S)組、腎缺血再灌注I/R4 h組、I/R12 h組、I/R24 h組,(S)組除不中斷血供，其余操作均同手術(shù)組。用酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)方法檢測(cè)各實(shí)驗(yàn)組血清中 IL-1、TNF-a、GM-CSF、IL-6的變化。實(shí)時(shí)熒光定量 PCR(Quantitative Real-time PCR,QRT-PCR)法分別檢查各實(shí)驗(yàn)組小鼠腎臟組織中TLR4 mRNA、TNF mR

3、NA、IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和CSF2 mRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果：
　　1.與正常對(duì)照組相比較，腎缺血再灌注I/R4h組、I/R12h組、I/R24 h組血清中 IL-1、IL-6、TNF-a、GM-CSF濃度均增高，且各指標(biāo)的變化趨勢(shì)基本相似，都在I/R12h組升高最顯著，之后逐漸下降，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2.與正常對(duì)照相比較，腎臟組織中 TLR4 mRNA、IL-1a mRNA、IL-6

4、 mRNA和 CSF2 mRNA水平均明顯增高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，且TLR4 mRNA與各炎性信號(hào)呈現(xiàn)相似的變化趨勢(shì)，均于 I/R12h達(dá)到高峰TNF-a水平無(wú)顯著變化。和(N)組比較，(S)組血清和腎臟組織中各因子含量均沒有特別變化。分別進(jìn)行TLR4 mRNA與IL-1amRNA、IL-6mRNA和CSF2mRNA的線性相關(guān)分析，結(jié)果顯示TLR4 mRNA與IL-1amRNA呈顯著正相關(guān)；TLR4 mRNA與IL-6mRNA呈顯著正相

5、關(guān)；TLR4 mRNA與CSF2 mRNA呈顯著正相關(guān)；本研究尚未發(fā)現(xiàn)TLR4 mRNA與TNF-amRNA有相關(guān)性。
　　結(jié)論：
　　1.與對(duì)照組比較，I/R4h組、I/R12h組、I/R24h組血清中TNF-a、IL-1、IL-6、GM-CSF水平升高，12h組升高顯著，說明在腎缺血再灌注損傷情況下，TNFa、IL-1、 IL-6、GM-CSF參與早期腎臟損傷的發(fā)病過程。
　　2.缺血再灌注后腎組織TLR4mRNA

6、的表達(dá)水平和IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和 CSF2 mRNA的表達(dá)水平均高于正常對(duì)照組，且增高趨勢(shì)與這幾個(gè)炎性信號(hào)變化一致，均于12h增高最顯著，隨著再灌注時(shí)間延長(zhǎng)，表達(dá)水平又下降。相關(guān)分析表明，缺血再灌注后腎臟組織中 TLR4 mRNA的表達(dá)水平與 IL-1a mRNA、IL-6 mRNA和CSF2 mRNA的表達(dá)水平有強(qiáng)相關(guān)性，提示Toll樣受體可能通過介導(dǎo)炎性反應(yīng)信號(hào)通路參與了腎臟缺血再灌注腎臟的損傷過程，在腎缺血再