抗氧化蛋白Peroxiredoxin家族在小鼠腎缺血再灌注損傷中的動態(tài)表達研究.pdf

1、目的：
　　建立小鼠腎缺血再灌注損傷模型，研究再灌注不同時間點腎功能及腎組織形態(tài)改變；檢測Peroxiredoxins（Prxs）在小鼠腎缺血再灌注損傷中的動態(tài)表達及其抗氧化作用，探討其在腎缺血再灌注中的保護作用機制，為臨床防治腎缺血再灌注損傷提供實驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、將80只昆明白小鼠分為缺血再灌注（IR）組和假手術(shù)對照（Sham）組。IR組：40只，按再灌注4、8、12、24、72h隨機分為5小組，每組8

2、只，通過分離夾閉雙側(cè)腎蒂45min建立小鼠腎缺血再灌注損傷模型；Sham組：40只，按再灌注4、8、12、24、72h隨機分為5小組，每組8只，只分離雙側(cè)腎蒂不夾閉。
　　2、測定IR組及Sham組再灌注不同時間點血清中肌酐（Scr）和尿素氮（BUN）水平。
　　3、HE染色后光鏡下觀察腎組織形態(tài)學(xué)改變。
　　4、使用MDA試劑盒檢測腎組織的氧化損傷。
　　5、采用實時定量RT-PCR法檢測Prxs mRNA在缺

3、血再灌注后不同時間點的表達變化。
　　6、采用Western Blot方法和免疫組化技術(shù)檢測Prxs蛋白在缺血再灌注后不同時間點的表達變化。
　　結(jié)果：
　　1、與Sham組相比，IR組小鼠出現(xiàn)腎功能不全，血清中肌酐和尿素氮水平隨再灌注時間的延長不斷升高，并在24h達到高峰（p<0.05）。
　　2、缺血再灌注損傷后小鼠腎臟組織病理改變包括腎小管擴張，腎小管上皮細胞扁平，刷狀緣消失，腎小管上皮細胞泡沫化，甚至脫落

4、、壞死；腎間質(zhì)出血、水腫；管腔阻塞。病理評分以再灌注24h組損傷最嚴重（p<0.05），72h組織損傷逐步恢復(fù)正常。小鼠腎功能不全和組織形態(tài)改變提示腎缺血再灌注模型建立成功。
　　3、腎組織中MDA含量在缺血再灌注后不斷增高，24h增高最顯著（p<0.05），72小時有所恢復(fù)。
　　4、Prxs的mRNA在小鼠腎組織中均有表達。與假手術(shù)組相比，Prx1、Prx4和Prx5的mRNA在腎缺血再灌注后表達沒有明顯的改變，Prx2

5、、Prx3的mRNA在再灌注4小時開始表達增高（p<0.05），而Prx6的mRNA在再灌注8h開始表達增高（p<0.05），三者均在24h表達達到峰值，72小時有所恢復(fù)。
　　5、與假手術(shù)組相比，Prx1、Prx4和Prx5的蛋白在腎缺血再灌注后表達沒有明顯的改變，而Prx2、Prx3和Prx6的蛋白在缺血再灌注后24h內(nèi)隨再灌注時間的延長表達逐漸增高（p<0.05）。
　　6、免疫組化結(jié)果顯示，在缺血再灌注4h和8h，P

6、rx2主要在腎遠端小管中表達顯著增高（p<0.05），而在再灌注12h和24h，Prx2在腎遠端小管和近端小管處均表達顯著增高（p<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、通過夾閉小鼠雙側(cè)腎蒂45min能夠成功建立腎缺血再灌注損傷模型，且組織損傷在24h內(nèi)隨再灌注時間的延長而逐步加重。
　　2、氧化應(yīng)激參與腎缺血再灌注損傷。
　　3、腎組織在缺血再灌注后能夠通過提高Prx2、Prx3和Prx6的表達來增強細胞的抗氧化能