水飛薊素通過抑制腎組織炎癥反應及細胞凋亡減輕腎缺血再灌注損傷.pdf

1、目的:
　　腎缺血再灌注損傷（renal ischemic reperfusion injury，renal I/R）是臨床上不可避免的病理過程及治療難題，常發(fā)生于需要阻斷腎臟血供手術過程，如腎外傷、腎腫瘤腎部分切除、腎移植，導致腎臟急性功能衰竭及移植腎急性排斥反應、抑制腎功能恢復延遲、慢性排斥反應和纖維化。因此如何有效減輕腎缺血再灌注損傷是臨床上急需解決的問題。水飛薊素（Silymarin）是一種抗氧化活性物，臨床上已廣泛應用于

2、治療各種病因引起的肝臟疾病。前期研究表明，水飛薊素具有抗腫瘤、抗氧化、抑制炎癥反應及細胞凋亡的作用。因此，水飛薊素能否抑制腎缺血再灌注過程中的炎癥反應、減輕腎損傷保護腎功能？本實驗旨在研究水飛薊素對小鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用及其機制。
　　方法:
　　第一部分：設計一種簡單穩(wěn)定的小鼠腎缺血再灌注模型，分別檢測假手術組和I/R組小鼠血清肌酐及尿素氮水平，PAS染色觀察各組小鼠腎病理損傷；將小鼠按缺血時間分為5組：0 min

3、、20 min、30 min、40 min、50 min，分別檢測48小時后各組小鼠生存率。
　　第二部分：檢測水飛薊素（Silymarin）對小鼠腎缺血再灌注損傷的保護作用，將小鼠隨機分為3組：假手術組（Sham組）、乙醇+I/R組、水飛薊素+I/R組，檢測各組小鼠術后10天生存率，檢測各組小鼠血清肌酐及尿素氮水平，PAS染色檢測各組小鼠腎組織病理損傷，檢測各組小鼠腎組織髓過氧化物酶活性，免疫熒光檢測各組小鼠腎組織CD68表達，

4、ELISA及RT-PCR檢測各組小鼠腎組織TNF-α、IL-1β和IL-6合成及分泌水平，TUNEL檢測各組小鼠腎細胞凋亡數(shù)， Western blot檢測各組小鼠腎組織Bcl-2、Bax和Cleaved-caspase3蛋白表達變化。
　　結果:
　　第一部分：小鼠腎缺血再灌注損傷后假手術組血清肌酐及尿素氮分別為（4.5±2.32 mg/L、296.1±36.03 mg/L），實驗組分別為（28±9.14 mg/L、123

5、8±363.9 mg/L），腎組織切片PAS染色觀察顯示實驗組腎組織廣泛壞死，各組小鼠48小鼠生存率分別為90％（20 min）、80%（30 min）、70%（40 min）、50 min缺血時間小鼠24小時內(nèi)全部死亡。
　　第二部分：乙醇+I/R組小鼠術后3天全部死亡，而水飛薊素+I/R組10天生存率為90%。假手術組小鼠肌酐及尿素氮水平分別為（4.1±1.15 mg/L）和（271.2±18.1 mg/L）；乙醇+I/R組小

6、鼠肌酐及尿素氮分別為（21.5±3.8 mg/L）和（1127.2±613 mg/L），而水飛薊素+I/R組小鼠分別為（12.9±2.41 mg/L）和（581±43.1 mg/L），術后第3天、第7天分別為（9.1±1.76 mg/L）和（6.5±1.3 mg/L）、（411±37.8 mg/L）和（237±24.3 mg/L）。各組腎臟半定量損傷評分分別為水飛薊素+I/R組（1.8±0.37）較乙醇+I/R組小鼠（4.6±0.24）

7、明顯減低；MPO檢測結果水飛薊素+I/R組小鼠及乙醇+I/R組分別為(21.2±8.4)U/g和（53.2±7.6）U/g；CD68細胞浸潤數(shù)分別為乙醇+I/R組小鼠（11.4±2.3）及水飛薊素（5.6±1.8）；水飛薊素+I/R組炎癥因子（TNF-α、IL-1β和IL-6）合成水平均較乙醇+I/R組下降；乙醇+I/R組及水飛薊素+I/R組細胞凋亡數(shù)分別為（47.67±2.4）和（27.67±3.56）。水飛薊素+I/R組Bax（0.

8、605±0.119）及Cleaved-caspase3（0.364±0.119）較乙醇+I/R組下降（0.832±0.158）和（0.865±0.142）降低，而Bcl-2(1.533±0.615)比乙醇組（0.145±0.089）增加。
　　結論:
　　腎缺血再灌注損傷時腎臟組織損傷程度與缺血時間成正比；水飛薊素能夠提高致死型小鼠腎缺血再灌注損傷模型小鼠的生存率，減少腎缺血再灌注損傷時腎臟組織損傷及保護腎功能；抑制腎缺血再