不同性別腎缺血再灌注損傷模型小鼠MicroRNA的表達(dá)譜分析.pdf

1、目的：
　　通過觀察不同性別小鼠腎缺血再灌注損傷前后腎臟組織中MicroRNA表達(dá)差異，找出具有顯著差異的MicroRNA，研究MicroRNA在不同性別小鼠腎缺血再灌注損傷中的作用及機(jī)制。
　　方法：
　　BALB/c小鼠隨機(jī)分為4組進(jìn)行不同處理：T1（雄性腎缺血45min再灌注24h組）、T2（雌性腎缺血45min再灌注24h組）、C1（雄性假手術(shù)組）、C2（雌性假手術(shù)組），每組20只。
　　BALB/c小鼠

2、術(shù)前禁食12 h，用10％水合氯醛作為麻醉劑(10 mL/kg)，沿腹部正中做一切口，進(jìn)入腹腔，找到腎蒂，用無損傷微型動脈夾迅速阻斷T1、T2組小鼠雙側(cè)腎臟血供，此時可見腎臟在30s內(nèi)由鮮紅變醬紫色，則表示夾閉成功，阻斷45 min后去除動脈夾可見腎臟迅速由醬紫色恢復(fù)原來顏色（鮮紅色），分層縫合關(guān)閉腹腔并滴入1-2ml生理鹽水保持腹腔濕潤[1.]。
　　C1、C2假手術(shù)組找到腎蒂后不阻斷腎蒂血流，術(shù)中應(yīng)用生理鹽水使小鼠保持充分的水

3、化，待45 min后，分層縫合關(guān)閉腹腔術(shù)后將小鼠放置在26度的恒溫房中飼養(yǎng)，保持充足的食物和水。術(shù)后小鼠存活24 h表示建模成功。
　　通過MicroRNA基因芯片技術(shù)檢測各組小鼠腎臟MicroRNA表達(dá)量后，對比各組小鼠間MicroRNA表達(dá)量，找出具有顯著差異的MicroRNA；接著采用實(shí)時熒光定量PCR檢測各組中具有顯著差異的MicroRNA表達(dá)量，其結(jié)果是否與MicroRNA芯片相符。
　　結(jié)果：
　?。?）T

4、1（雄性腎缺血45min再灌注24h組）、T2（雌性腎缺血45min再灌注24h組）、C1（雄性假手術(shù)組）、C2（雌性假手術(shù)組），分別為80%、100%、100%、100%。雌性腎缺血再灌注組與與雄性腎缺血再灌注組比較后血清肌酐及血清尿素氮變化具有明顯差異性。而雌性假手術(shù)組與雄性假手術(shù)組血清肌酐及血清尿素氮變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　（2）C1（雄性IRI0min組）、C2（雌性IRI0min組）組中腎組織病理結(jié)構(gòu)基本正常，僅可見局部

5、腎小管上皮水腫及少量變性；T2（雌性IRI45min組）組顯微鏡下，可見腎小管上皮細(xì)胞壞死、崩解脫落以及細(xì)胞核濃縮、碎裂、核溶解，箭頭所示。部分腎小管管腔擴(kuò)張、管腔輪廓模糊；T1（雄性IRI45min組）組中仍可見的腎小管上皮細(xì)胞壞死、空泡變性、腎小管刷狀緣扁平以及細(xì)胞核濃縮、碎裂、核溶解。RAbb半定量對模型腎進(jìn)行腎小管病理損傷評分C2（雌性IRI0min組）、T2（雌性IRI45min組）、之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.05；C1（

6、雄性IRI0min組）及T1（雄性IRI45min組）組之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05，如圖2。
　　（3）四組小鼠中MicroRNA的表達(dá)存在明顯差異，在T2（雌性腎缺血45min再灌注24h組）與T1（雄性腎缺血45min再灌注24h組）對比發(fā)現(xiàn)有表達(dá)上調(diào)的MicroRNA有5個；T2（雌性腎缺血45min再灌注24h組）與C2（雌性假手術(shù)組）對比發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的MicroRNA有29個，其中上調(diào)的有MicroRNA有25個，

7、下調(diào)的MicroRNA有4個；T1(雄性腎缺血45min再灌注24h組)與C1(雄性假手術(shù)組)對比發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的MicroRNA有38個，其中上調(diào)的MicroRNA有9個，下調(diào)的MicroRNA有29個；C2(雌性假手術(shù)組)與C1(雄性假手術(shù)組)對比發(fā)現(xiàn)有差異表達(dá)的MicroRNA有102個，其中上調(diào)MicroRNA的有22個，下調(diào)的MicroRNA有80個。
　?。?）對比四組BALB/c小鼠腎組織的MicroRNA表達(dá)，實(shí)驗(yàn)

8、發(fā)現(xiàn)mir-21及mir-664在各組腎臟組織中的表達(dá)均有著明顯差異性，其中雄性假手術(shù)組與雌性假手術(shù)組相比mir-21和mir-664表達(dá)相近，雄性腎缺血再灌注組與雄性假手術(shù)組相比上調(diào)分別為1.5倍和1.3倍，而雌性腎腎缺血再灌注組與雄性假手術(shù)組相比分別上調(diào)2倍和2.2倍，采用實(shí)時熒光定量PCR檢測mir-21及mir-664的表達(dá)量，其結(jié)果與基因芯片相符。
　　結(jié)論：
　?。?）成功構(gòu)建了BALB/c小鼠血腎缺血再灌注損傷