DHA和遠(yuǎn)志皂苷對丙泊酚重復(fù)麻醉大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷的干預(yù)作用.pdf

1、本文主要講述了以下幾個方面：
　　第一部分 DHA對丙泊酚重復(fù)麻醉大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷的干預(yù)作用
　　目的：研究不同劑量的DHA對丙泊酚重復(fù)麻醉SD大鼠引起的學(xué)習(xí)記憶功能損傷的干預(yù)作用、量效關(guān)系及作用機制，以期為臨床使用丙泊酚重復(fù)麻醉產(chǎn)生的副作用提供改善解決的方案。
　　方法：將60只SD大鼠隨機分為6組，每組10只，生理鹽水對照組（A組），溶劑脂肪乳對照組（B組），丙泊酚組（C組），低劑量DHA+丙泊酚組（D組），中劑量

2、DHA+丙泊酚組（E組），高劑量DHA+丙泊酚組（F組）。丙泊酚組（C組）連續(xù)腹腔內(nèi)注射丙泊酚5天，每天1次，劑量為75 mg/kg/day;A組、B組與C組方法相同，B組劑量為10 ml/kg/day的脂肪乳;A組劑量為10 ml/kg/day的0.9％生理鹽水;F組在給予丙泊酚前10天開始每天灌胃給予3g/kg/day的DHA，然后繼續(xù)給予5天DHA的同時每天腹腔注射75 mg/kg/day的丙泊酚;E組、D組方法同F(xiàn)組。E組、D組

3、分別為1g/kg/day和0.3g/kg/day的DHA。所有大鼠在第1～5天的訓(xùn)練前腹腔注射丙泊酚或脂肪乳或0.9％生理鹽水，在第6天的測試前不給予任何藥物（注:丙泊酚麻醉大鼠用新生兒血氧飽和度監(jiān)測，排除因缺氧導(dǎo)致的腦損傷，注射丙泊酚麻醉的大鼠在翻正反射恢復(fù)后20分鐘進(jìn)行訓(xùn)練）。
　　結(jié)果：實驗期間各組大鼠皮毛顏色正常，能夠自由進(jìn)食和飲水，未見明顯異常病理狀態(tài);C組大鼠的活動量相比其它各組有明顯的減少，表現(xiàn)為行動遲緩、精神萎靡;

4、各DHA組大鼠也有不同程度的活動量減少。A組與B組大鼠逃逸潛伏期及穿越平臺的次數(shù)無顯著差異(P＞0.05)，與A組大鼠相比，C組大鼠逃逸潛伏期明顯延長(P＜0.01)，穿越平臺的次數(shù)明顯減少(P＜0.01)，有顯著差異;與C組大鼠相比，E組(P＜0.05)與F組(P＜0.01)大鼠的逃逸潛伏期明顯縮短(P＜0.01)，并且穿越平臺的次數(shù)明顯增加(P＜0.01)。顯然，隨著DHA劑量的增加，D組、E組、F組大鼠的逃逸潛伏期呈下降的趨勢，而

5、穿越平臺的次數(shù)則逐漸增加。A組與B組大鼠無論是谷氨酸和γ-氨基丁酸的含量還是Glu/GABA比值均無顯著差異(P＞0.05)。與A組大鼠相比，C組大鼠谷氨酸含量和Glu/GABA比值顯著增加(P＜0.01)，而γ-氨基丁酸的含量顯著減少(P＜0.05)。與C組大鼠相比較， D組(P＜0.05)、E組(P＜0.05)與F組(P＜0.01)大鼠的谷氨酸含量顯著降低而γ-氨基丁酸的含量升高(P＜0.05)。隨著DHA劑量的增加，谷氨酸含量逐漸

6、降低而γ-氨基丁酸含量逐漸升高，表現(xiàn)出了一定的劑量依賴性。A組與B組大鼠SOD和GSH-Px的活力無顯著差異(P＞0.05)。與A、B對照組相比，C組大鼠海馬組織內(nèi)SOD和GSH-Px的活力分別下降了35.1％(P＜0.01)、39.8％(P＜0.01)。而E組(P＜0.05)與F組(P＜0.01)則使SOD與GSH-Px的活力明顯增強且隨著DHA劑量的增加，DHA的作用明顯增強。A組與B組大鼠的MDA濃度無顯著差異(P＞0.05)，與

7、A、B對照組大鼠相比，經(jīng)丙泊酚重復(fù)麻醉處理的各組大鼠MDA濃度明顯升高(P＜0.01)。D組(P＜0.05)、E組(P＜0.05)、F組(P＜0.01)的MDA濃度與C組大鼠相比顯著降低。A組與B組大鼠的BDNF濃度無顯著差異(P＞0.05)，與A組大鼠相比，C組大鼠的BDNF濃度下降了34.7％(P＜0.05)，有顯著差異。與C組大鼠相比，D組、E組、F組大鼠給予DHA使得BDNF的濃度分別升高了11.3％(P＜0.05)、33.9％

8、(P＜0.05)、47.8％(P＜0.01)，差異有顯著性，說明隨著DHA劑量的增加，其干預(yù)作用逐漸增強。
　　結(jié)論：DHA通過調(diào)節(jié)Glu與GABA的濃度平衡，降低氧化應(yīng)激損傷和增加BDNF的水平從而改善丙泊酚重復(fù)麻醉引起的學(xué)習(xí)與記憶障礙，而且DHA劑量增加，干預(yù)作用增強?；谏鲜鲅芯拷Y(jié)果，我們建議DHA可有效的用于丙泊酚重復(fù)麻醉導(dǎo)致的學(xué)習(xí)與記憶障礙的術(shù)后治療，但是需要更多的研究支持這一假設(shè)。
　　第二部分 遠(yuǎn)志皂苷對丙泊酚

9、重復(fù)麻醉大鼠學(xué)習(xí)記憶損傷的干預(yù)作用
　　目的:研究不同劑量遠(yuǎn)志皂苷對丙泊酚重復(fù)麻醉大鼠所導(dǎo)致學(xué)習(xí)記憶損傷的干預(yù)作用及作用機制，為臨床使用丙泊酚重復(fù)麻醉產(chǎn)生的副作用提供更多的解決方案。
　　方法:將60只SD大鼠隨機分為6組，生理鹽水對照組（A組），溶劑脂肪乳對照組（B組），丙泊酚組（C組），低劑量組(50mg/kg/day)遠(yuǎn)志皂苷+丙泊酚組（D組），中劑量組(200mg/kg/day)遠(yuǎn)志皂苷+丙泊酚組（E組），高劑量組(

10、500mg/kg/day)遠(yuǎn)志皂苷+丙泊酚組（F組）。C組于實驗開始第11～15天連續(xù)腹腔內(nèi)注射5天丙泊酚注射液，每天1次，劑量為75mg/kg/day;B組與C組方法相同，給藥劑量為10ml/kg/day的脂肪乳;A組同上，連續(xù)注射10ml/kg/day的0.9％生理鹽水;F組在實驗第1～10天（即給予丙泊酚麻醉前10天）開始每天灌胃遠(yuǎn)志皂苷，然后繼續(xù)給予5天遠(yuǎn)志皂苷的同時每天腹腔注射75 mg/kg/day的丙泊酚;E組、D組給予方

11、法同F(xiàn)組。各組大鼠在第16～20天的水迷宮測試前腹腔內(nèi)注射丙泊酚或脂肪乳或生理鹽水，在第21天的測試前不給予任何藥物（注:丙泊酚麻醉大鼠用新生兒血氧飽和度監(jiān)測，排除因缺氧導(dǎo)致的腦損傷，注射丙泊酚麻醉的大鼠在翻正反射恢復(fù)后20分鐘進(jìn)行訓(xùn)練）。
　　實驗期間觀察動物日常狀況，并每周稱量體重;大鼠的學(xué)習(xí)記憶情況采用Morris Water Maze（MWM）即水迷宮測定;解剖動物觀察腦系數(shù)并對海馬組織進(jìn)行組織病理學(xué)檢查;測定腦細(xì)胞MDA

12、、SOD、GSH的活性，觀察細(xì)胞損傷的程度;提取各組大鼠海馬細(xì)胞DNA，進(jìn)行片斷化檢測;檢測大鼠海馬組織細(xì)胞凋亡相關(guān)因子Bcl-2和Caspase-3表達(dá)量的情況，觀察細(xì)胞凋亡情況。
　　結(jié)果:1.各組大鼠皮毛顏色正常，能夠自由進(jìn)食和飲水，無明顯異常病理狀態(tài);C組大鼠的活動量相比于A組、B組有明顯的減少，表現(xiàn)為行動遲緩、精神萎靡;D組、E組、F組大鼠也有不同程度的活動量減少。各組大鼠3周內(nèi)的體重逐漸增長，C組、D組、E組、F組與A

13、、B對照組比較未見明顯統(tǒng)計學(xué)差異(P＞0.05)，但C組大鼠的體重增長有緩慢的趨勢。
　　2.定位航行實驗和空間探索實驗發(fā)現(xiàn)，A組與B組大鼠逃逸潛伏期及穿越平臺的次數(shù)以及目標(biāo)象限停留時間均無顯著差異(P＞0.05)。與A組比較，C組、D組、E組、F組與A組之間存在顯著差異(P＜0.05)，與C組比較，D組、E組、F組差異有顯著性(P＜0.05)，提示隨著遠(yuǎn)志皂苷劑量的增加，其潛伏期逐漸縮短，穿越平臺的次數(shù)增加以及目標(biāo)象限停留時間增

14、長。
　　3.A組與B組大鼠各氧化損傷指標(biāo)無顯著差異(P＞0.05)。與A組、B組比較，其余各組大鼠MDA、SOD、GSH有明顯差異(P＜0.05)。與A組比較，C組MDA含量明顯增加，SOD含量與GSH濃度顯著降低，說明C組大鼠腦細(xì)胞氧化損傷嚴(yán)重;與C組比較，D組、E組、F組MDA含量逐漸降低，E組、F組有顯著差異(P＜0.05);與C組比較，D組、E組、F組SOD、GSH指標(biāo)逐漸升高，F(xiàn)組有顯著差異(P＜0.05)。
　

15、　4.A組與B組大鼠腦系數(shù)無顯著差異(P＞0.05)。與A組比較，C組大鼠腦系數(shù)有明顯減小(P＜0.05)，表明C組大鼠腦細(xì)胞有一定程度的萎縮;遠(yuǎn)志皂苷各劑量組大鼠腦系數(shù)有少量減少，E組有顯著差異(P＜0.05)。與C組比較，遠(yuǎn)志皂苷各劑量組腦系數(shù)有一定程度的增加，有顯著差異(P＜0.05)，F(xiàn)組高于E組與D組。表明低、中、高劑量的遠(yuǎn)志皂苷均能夠一定程度改善丙泊酚重復(fù)麻醉大鼠的腦功能，但是仍然低于對照組。
　　5.組織病理學(xué)檢查發(fā)

16、現(xiàn)，A組和B組大鼠海馬組織結(jié)構(gòu)清晰，神經(jīng)細(xì)胞排列緊密，細(xì)胞染色均勻，其形態(tài)完整無水腫;細(xì)胞質(zhì)染色清晰;細(xì)胞核呈藍(lán)紫色，核仁清晰可見，細(xì)胞核結(jié)構(gòu)完整。C組大鼠海馬組織的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)目明顯減少且排列不規(guī)整，細(xì)胞呈萎縮狀態(tài)，有濃染現(xiàn)象;部分細(xì)胞核核仁不明顯，細(xì)胞核溶解固縮，大量空泡物質(zhì)出現(xiàn)在細(xì)胞核周圍;細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)染色不均;在神經(jīng)細(xì)胞周圍可見散在的大量炎性細(xì)胞。遠(yuǎn)志皂苷各劑量組與C組比較，海馬組織有所改善，可見細(xì)胞染色均勻，僅少量細(xì)胞形態(tài)固縮，

17、排列不規(guī)整;細(xì)胞核核仁不明顯，且細(xì)胞核體積增大;細(xì)胞質(zhì)染色尚清晰;在細(xì)胞周圍可見散在的少量炎性細(xì)胞，F(xiàn)組優(yōu)于E組與D組。
　　6.A組與B組海馬細(xì)胞DNA電泳都是單條帶，表明DNA結(jié)構(gòu)完整;而C組海馬細(xì)胞DNA電泳出現(xiàn)明顯的梯狀帶表明DNA出現(xiàn)斷裂;遠(yuǎn)志皂苷D、E、F劑量組出現(xiàn)梯狀帶的數(shù)量依次減少，但其數(shù)量都低于丙泊酚組。
　　7.ELISA結(jié)果顯示:A組與B組大鼠凋亡因子表達(dá)無顯著差異(P＞0.05)。與A組比較，C組Bc

18、l-2蛋白表達(dá)量顯著降低(P＜0.05)，Caspase-3表達(dá)量顯著升高(P＜0.05)。與C組比較，D組、E組、F組Bcl-2蛋白表達(dá)量不同程度的逐漸升高，Caspase-3表達(dá)量不同程度的逐漸降低，有顯著差異(P＜0.05)。
　　結(jié)論:遠(yuǎn)志皂苷通過降低氧化應(yīng)激損傷，調(diào)控凋亡因子Bcl-2和Caspase-3的表達(dá)，減少了細(xì)胞凋亡的發(fā)生，減輕了海馬組織的損傷，增強了大鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力從而對丙泊酚重復(fù)麻醉所導(dǎo)致大鼠學(xué)習(xí)記憶