自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對尖銳濕疣皮損的檢測及意義.pdf

1、尖銳濕疣(CA)是由人乳頭瘤病毒(HPV)引起的一種常見性傳播疾病，該病對患者的身心健康、生殖健康和家庭幸福造成較大的危害。超過90％的外生殖器疣與低危型HPV6和11兩種亞型有關。近年來尖銳濕疣發(fā)病率不斷上升，其中亞臨床感染和潛伏感染遠多于典型尖銳濕疣，且HPV亞臨床和潛伏感染者也具有傳染性，對尖銳濕疣的流行、傳播、病程以及轉歸有一定的影響。臨床工作中亟需一種操作簡便、準確度高的檢測方法。然而目前HPV的臨床檢測手段不盡理想，尖銳濕疣

2、診斷，尤其在HPV亞臨床和潛伏感染的診斷缺乏便捷而準確的方法，易造成誤診與漏診。HPV病原學檢測如核酸分子技術，因實驗室要求高等原因，無法在臨床尤其基層醫(yī)院作為常規(guī)檢驗項目開展。曾有研究用HPV殼蛋白L1抗體免疫組化檢測HPV感染，發(fā)現其陽性檢出率較低而未能應用于臨床診斷。本研究評估了自主研發(fā)的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對尖銳濕疣皮損HPV感染的檢測意義和臨床應用可能性。
　　目的：
　　采用自行制備的HPV6b和

3、11型E7蛋白多克隆抗體，檢測外生殖器尖銳濕疣皮損組織中HPV6b和11型E7蛋白的表達，觀察與尖銳濕疣臨床診斷及RT-PCR檢測結果的符合率，探討該兩型抗體在臨床HPV檢測中的應用價值。
　　方法：
　　1.收集2013年9月至2014年10月間在杭州市富陽區(qū)第一人民醫(yī)院皮膚科確診的尖銳濕疣病例55例。常規(guī)消毒，局麻下用血管鉗夾取全部或部分疣體組織標本，經生理氯化鈉溶液沖洗，置入10％福爾馬林中固定，常規(guī)組織病理檢查，HE

4、染色。其中18例患者同時取疣體組織-80℃冰凍保存。
　　2.55例尖銳濕疣皮損石蠟標本，用HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體進行免疫組化法染色檢測。鏡下觀察細胞染色情況，分析陽性染色的細胞中定位、染色強度和陽性細胞百分比。
　　3.18例尖銳濕疣皮損冰凍標本用RT-PCR法測定HPV6b、11E7蛋白的mRNA表達情況，分析與免疫組化結果的符合率。
　　結果：
　　55例尖銳濕疣皮損的免疫組化染色顯示HPV6

5、b和11E7蛋白為胞核染色，而且皮損全層表皮細胞均可見陽性表達細胞，但以基底層較多。其中HPV6b E7和HPV11 E7蛋白陽性表達病例分別為42例（陽性率76.36％）和32例(陽性率58.18％)。HPV6b型和11型E7蛋白總陽性表達病例為52例(總陽性檢出率94.55％)，其中兩蛋白雙陽性表達22例（雙陽性率40.00％）。兩蛋白均陰性表達為3例（陰性率5.45％）。42例HPV6b E7陽性表達病例中有20例為HPV11 E

6、7表達陰性;32例HPV11E7陽性表達病例中有10例為HPV6bE7表達陰性。18例尖銳濕疣冰凍標本經RT-PCR法檢測，HPV6bE7和HPV11E7的mRNA表達陽性分別為15例和10例，雙陽性表達7例。陽性表達型別與免疫組化結果完全一致。
　　討論：
　　用自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化檢測55例CA標本，可以直觀地觀察到HPV6b和11型E7蛋白陽性表達細胞散在分布于皮損表皮各層，且主要為胞

7、核染色。HPV6b和11 E7的總陽性檢出率達94.55％，明顯高于HPV殼抗原免疫組化陽性檢出率，并與文獻報道的超過90％的尖銳濕疣由低危型HPV6和11兩種亞型感染所致的流行病學結論相符合。本研究提示，自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體免疫組化檢測尖銳濕疣標本的陽性率很高。用這兩型HPV E7抗體進行的免疫組化檢測還發(fā)現，HPV11型E7陽性表達的組織中僅部分表現為HPV6b型E7表達陽性，反之亦然。提示該兩型抗體間無交

8、叉反應。對其中18例患者皮損組織平行進行HPV6b和11型的E7 mRNA的RT-PCR法檢測，研究表明其陽性檢出率及陽性表達型別與免疫組化的結果完全一致，提示該兩型抗體對尖銳濕疣皮損組織中HPV6b、11的免疫組化法檢測型特異性很強。
　　結論：
　　該自行制備的HPV6b和11型E7蛋白多克隆抗體對尖銳濕疣皮損中HPV6b和11型感染檢出率很高，敏感性好，特異性強。未發(fā)現兩抗體有交叉反應，且可以直觀地觀察病損組織中HPV