NSCs與PLGA復(fù)合體移植對(duì)大鼠脊髓半橫斷損傷的修復(fù)作用.pdf

1、背景：
　　目前脊髓損傷(spinal cord injury，SCI)的預(yù)防、治療和康復(fù)是目前臨床工作種難以攻克的難題。而生物細(xì)胞學(xué)技術(shù)和組織工程技術(shù)的發(fā)展為治療脊髓損傷帶來新的治療方案。
　　目的：
　　研究乳鼠腦組織源神經(jīng)干細(xì)胞(neuralstem cells,NSCs)，聯(lián)合聚乳酸-乙醇酸工程支架（Poly-Lactic-co-glycolicacid，PLGA）移植治療SD大鼠脊髓半橫斷損傷的效果。

2、　　方法:
　?。?）乳鼠NSCs的分離和培養(yǎng)的優(yōu)化:取出生3天的SD乳鼠大腦顳葉皮質(zhì)，分別用機(jī)械吹打法、胰蛋白酶消化法分離培養(yǎng)，通過免疫熒光法對(duì)NSCs進(jìn)行鑒定和誘導(dǎo)分化;分別于培養(yǎng)的第2、5、7天計(jì)數(shù)細(xì)胞球直徑及數(shù)目;通過MTT法比較原代及傳代后第3亞代NSCs克隆增值速率。
　?。?）NSC與PLGA復(fù)合體移植治療SD大鼠脊髓半橫斷損傷修復(fù)作用:將72只雌性SD大鼠分成6組：正常組、假手術(shù)組、手術(shù)組、NSCs移植組、P

3、LGA移植組、NSCs+PLGA復(fù)合體共移植組。制作脊髓半橫斷模型，正常組不做處理，假手術(shù)組僅摘除椎板；其他各組行脊髓右側(cè)半橫斷術(shù)；術(shù)后第7天，再次打開脊髓，手術(shù)組于損傷處移入20ul培養(yǎng)液，NSCs移植組移入含NSCs培養(yǎng)液；PLGA移植組將PLGA組織工程支架植入脊髓損傷處;NSCs+PLGA復(fù)合體共移植組將NSCs+PLGA復(fù)合體植入脊髓損傷處。每組大鼠于術(shù)前1d、術(shù)后7d、移植后第1、2、4、8周行BBB評(píng)分、IP評(píng)分等行為學(xué)，

4、于移植后第2、4、8周,行電生理MEPs檢查、病理HE染色。
　　結(jié)果:
　?。?）NSCs的分離和培養(yǎng)的優(yōu)化：機(jī)械吹打組與胰酶消化組獲得的NSCs，行免疫熒光發(fā)現(xiàn)，Nestin、NF-200、GFAP染色均陽性，培養(yǎng)第5、7天時(shí)，機(jī)械吹打組獲得的細(xì)胞球數(shù)量和直徑均高于相同培養(yǎng)時(shí)間點(diǎn)的胰酶消化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。機(jī)械吹打組原代和第3亞代細(xì)胞第2、5天細(xì)胞克隆增殖能力均優(yōu)于同時(shí)間節(jié)點(diǎn)的胰酶消化組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)

5、意義（p<0.05）。
　　（2）行為學(xué)評(píng)價(jià)：移植后第4、8周時(shí)NSCs移植組、PLGA移植組、NSCs+PLGA復(fù)合體移植組BBB評(píng)分、IP評(píng)分高于手術(shù)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）；NSCs移植組、PLGA移植兩組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p>0.05）。移植后第4、8周，NSCs+PLGA復(fù)合體移植組BBB評(píng)分、IP評(píng)分高于NSCs移植組、PLGA移植組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。
　?。?）電生理：運(yùn)動(dòng)

6、誘發(fā)電位（MEPs）潛伏期比較顯示：移植后第2、4、8周，NSCs移植組、PLGA移植組、NSCs+PLGA復(fù)合體移植組優(yōu)于手術(shù)組（p<0.05）；移植后第2、4、8周NSCs+PLGA復(fù)合體移植組優(yōu)于NSCs移植組、PLGA移植組（p<0.05）。同時(shí)間點(diǎn)各組健側(cè)MEPs的潛伏期輕度優(yōu)于手術(shù)側(cè)，但是在統(tǒng)計(jì)學(xué)上差異無意義（p>0.05）。
　　（4）病理HE染色：各實(shí)驗(yàn)組脊髓組織行HE染色后，發(fā)現(xiàn)移植后第8周時(shí)，NSCs移植組、P

7、LGA移植組、NSCs+PLGA移植組損傷處脊髓組織結(jié)構(gòu)較前有所恢復(fù)，空洞、瘢痕組織少于手術(shù)組。NSCs+PLGA復(fù)合體移植組周圍組織結(jié)構(gòu)恢復(fù)更好，空洞、瘢痕組織少于NSCs移植組、PLGA移植組。
　　結(jié)論：
　　1.機(jī)械吹打法、胰酶消化法均可成功分離培養(yǎng)、誘導(dǎo)分化NSCs，但是機(jī)械吹打法分離培養(yǎng)的NSCs的克隆增殖能力優(yōu)于胰酶消化法。
　　2.通過行為學(xué)、電生理及病理學(xué)評(píng)估發(fā)現(xiàn)NSCs+PLGA復(fù)合體移植對(duì)SD大鼠