不同品種仔豬TLRs表達(dá)規(guī)律及VA對(duì)仔豬TLRs表達(dá)量影響的研究.pdf

1、TOLL樣受體(Toll-like receptors, TLRs)是參與天然免疫的細(xì)胞跨膜受體及病原模式識(shí)別受體，它通過(guò)啟動(dòng)天然免疫反應(yīng)和激發(fā)適應(yīng)性免疫反應(yīng)的信號(hào)傳導(dǎo)，在宿主防御微生物病原體感染過(guò)程中發(fā)揮重要作用。維生素A作為一種免疫調(diào)節(jié)劑，對(duì)動(dòng)物的抗感染能力和體內(nèi)一些基因表達(dá)的影響十分明顯。然而，目前尚無(wú)維生素A對(duì)不同品種豬TLRs基因表達(dá)影響的報(bào)道。本研究旨在比較考察不同品種仔豬TLRs表達(dá)規(guī)律的基礎(chǔ)上，研究揭示VA對(duì)不同品種仔豬

2、不同感染狀態(tài)下組織TLRs表達(dá)量的影響。本研究共包括以下兩個(gè)試驗(yàn)。
　　 試驗(yàn)一榮昌仔豬和DLY仔豬TLRs基因表達(dá)發(fā)育規(guī)律
　　 試驗(yàn)采用2×4因子設(shè)計(jì)，即榮昌豬和DLY豬2個(gè)品種、4個(gè)日齡階段(0、7、14和21d)，比較考察地方仔豬和外種仔豬TLRs的基因發(fā)育表達(dá)規(guī)律。選取純種榮昌仔豬和DLY仔豬各4窩，在仔豬出生后的0、7、14和21d，每窩各選1頭正常仔公豬屠宰，分離肝臟、脾臟、肺、空腸和腸系膜淋巴結(jié)樣品，液氮

3、速凍。用Real-time PCR方法檢測(cè)組織中TLR2,3,4,7,9基因mRNA的表達(dá)水平。
　　 結(jié)果表明，不同品種仔豬肝、脾、肺、腸系膜淋巴結(jié)和空腸組織中TLR2、3、4、7、9的mRNA表達(dá)量存在差異，榮昌豬顯著高于DLY豬(P＜0.05)；并且表達(dá)量隨日齡增加呈現(xiàn)一定的變化規(guī)律，總體是隨著日齡的增加，表達(dá)量顯著增加P＜0.05)。
　　 試驗(yàn)二維生素A對(duì)藍(lán)耳病疫苗接種不同品種仔豬TLRs的表達(dá)及
　　

4、 免疫力的影響
　　 選擇健康、21日齡斷奶、體重3.5～4kg的榮昌仔豬和體重6.5～7kg的DLY仔豬各24頭，在試驗(yàn)的前2周兩個(gè)品種的仔豬均采食相同的VA缺乏日糧，仔豬單籠飼養(yǎng)；2周后，分別將兩個(gè)品種的仔豬按體重隨機(jī)分為2個(gè)處理，分別繼續(xù)飼喂VA缺乏日糧和正常VA日糧(VA添加量2200IU/kg)，即為2×2因子設(shè)計(jì)共4個(gè)處理，主效應(yīng)分別為2個(gè)品種(榮昌和DLY)和2個(gè)VA添加水平(0和2200IU/kg)，每個(gè)處理12

5、個(gè)重復(fù)；繼續(xù)飼喂2周后，再將每個(gè)處理一分為二，分別注射PBS液和藍(lán)耳病弱毒疫苗(PRRSV)，即為2×2×2因子設(shè)計(jì)共8個(gè)處理，主效應(yīng)分別為2個(gè)品種(榮昌和DLY)、2個(gè)VA添加水平(0和2200IU/kg)、2種疫苗免疫狀態(tài)(注射PBS液和注射藍(lán)耳病弱毒疫苗)，每個(gè)處理6個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)1頭仔豬：試驗(yàn)繼續(xù)2周后，所有試豬麻醉后采樣待測(cè)。同時(shí)，在試驗(yàn)的第2、4和6w末仔豬前腔靜脈采血，分離血清待測(cè)。研究結(jié)果表明：
　　 1、不同

6、VA營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)模型建立。第2、4、6w末時(shí)血清視黃醇濃度DLY豬顯著高于榮昌豬。隨飼喂VA缺乏日糧時(shí)間的延長(zhǎng)，兩個(gè)品種仔豬血清視黃醇濃度均呈下降趨勢(shì)，采食補(bǔ)充VA日糧后血清視黃醇含量增加。第4和6w末缺乏組血清VA含量較補(bǔ)充組分別降低9％和25.11％。同時(shí)，接種PRRSV加劇了血清視黃醇濃度的降低。
　　 2、PRRSV攻毒模型建立。血清中PRRSV抗體檢測(cè)結(jié)果表明，所有試豬在第35d的血清中均未檢測(cè)到PRRSV陽(yáng)性，第42d的

7、血清中，接種PRRSV的24頭仔豬血清中均檢測(cè)到PRRSV陽(yáng)性。同時(shí)，第42d末接種PRRSV仔豬的肺和呼吸道組織中均檢測(cè)到PRRSVmRNA，而未接種組均未檢出。
　　 3、不同品種豬的ADG和ADFI差異顯著，DLY豬的ADG(P＜0.0001)和ADFI(P＜0.0001)均顯著高于榮昌豬。攻毒顯著降低了ADG(P＜0.0001)和ADFI(P=0.0036)，顯著升高了料重比(P＜0.0001)，且對(duì)DLY仔豬的影響程度

8、顯著強(qiáng)于榮昌仔豬(P＜0.0001)。
　　 4、第4w末DLY仔豬血清IFN.γ濃度顯著低于榮昌豬(P＜0.05),IL-2和IL-4濃度品種間差異不顯著。維生素A水平、品種與維生素A互作對(duì)血清IFN-γ、IL-2和IL-4濃度無(wú)顯著影響。第6w末，DLY豬血清IFN-γ,IL-2,IL-4濃度略低于榮昌豬，差異不顯著。除動(dòng)物品種、維生素A水平和攻毒三者互作(P=0.0251)對(duì)血清IL-2的濃度產(chǎn)生顯著影響外，品種、維生素A

9、水平、攻毒以及三者間的兩兩互作均未對(duì)血清IL-2和IL-4濃度產(chǎn)生顯著影響。除攻毒(P=0.0030)對(duì)血清IFN-γ濃度產(chǎn)生顯著影響外，動(dòng)物品種、維生素A水平以及三者間的兩兩互作均未對(duì)血清IFN-γ濃度產(chǎn)生顯著影響。
　　 5、豬品種、日糧VA水平、PRRSV的攻毒狀態(tài)，以及它們間的互作影響TLRsmRNA的組織表達(dá)量。榮昌仔豬各組織TLR2、3、7、9的mRAN表達(dá)量均高于DLY仔豬，其中榮昌豬肝臟、肺、腸系膜淋巴結(jié)和空腸中

10、TLR2、TLR3、TLR7(肺例外)和TLR9(肝和腸系膜淋巴結(jié)除外)的mRNA表達(dá)量均顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)高于DLY仔豬。除脾臟外，VA缺乏均導(dǎo)致組織TLR2、3、7、9的mRAN表達(dá)量顯著(P＜0.05)或極顯著(P＜0.01)增加。PRRSV攻毒導(dǎo)致各組織中TLR2、3、7、9的mRAN表達(dá)量均有不同程度增加，對(duì)各組織中TLR7和TLR9的影響大于TLR2和TLR3。品種×VA、品種×攻毒、VA×攻毒、品

11、種×VA×攻毒對(duì)組織TLR2、3、7、9的mRNA表達(dá)量存在不同程度的互作影響。
　　 綜上所述，本研究結(jié)果表明，不同品種豬肝、脾、肺、腸系膜淋巴結(jié)和空腸等組織中TLR2、3、4、7、9的mRNA表達(dá)量存在差異，榮昌豬高于DLY豬，并且表達(dá)量隨日齡增加總體呈顯著增加。接種PRRSV后，不同品種間仍表現(xiàn)為榮昌豬組織TLR2、3、7、9基因表達(dá)量高于DLY豬。不同品種間的抵抗力可能與TLRs的表達(dá)有關(guān)。接種PRRSV上調(diào)了仔豬機(jī)體T