氨氣對仔豬肺部結(jié)構(gòu)及纖維化相關(guān)基因表達的影響.pdf

1、冬季，保育豬舍內(nèi)由于通風換氣和保溫的矛盾，造成豬舍內(nèi)有害氣體尤其是氨氣濃度上升，對仔豬呼吸道健康可能造成不良影響。本試驗通過人工模擬一定濃度氨氣環(huán)境，研究了氨氣對仔豬肺部結(jié)構(gòu)及基因表達譜的影響。
　　試驗材料和方法：選取7周齡、體重14kg長大去勢公豬12頭，隨機分為4組（NC組，D4組，D8組，D12組），每組3頭。采用56±4 mg/m3的氨氣濃度，每天刺激8小時，其中NC組不刺激，D4，D8，D12組分別連續(xù)刺激4d、8d、

2、12d。階段刺激結(jié)束，空腹12h后采集豬只外周血液進行血常規(guī)檢測，解剖采集肺部組織制作組織切片進行組織形態(tài)學觀察，同時提取RNA進行轉(zhuǎn)錄組測序。
　　主要試驗結(jié)果：
　?。?）氨氣刺激過程中豬只的活動量明顯減少，基本沒有采食和飲水行為發(fā)生；
　?。?）三分類血常規(guī)結(jié)果顯示白細胞總數(shù)隨著刺激時間的延長而逐漸增多，淋巴細胞、中性粒細胞和單核細胞也分別出現(xiàn)了不同程度的增多；
　?。?）肺組織蘇木精伊紅（HE）染色和天狼

3、星紅（SR）染色顯示，氨氣刺激組肺組織出現(xiàn)了炎性細胞浸潤，以及不同程度細胞外基質(zhì)（ECM）進行性異常積聚和輕度的纖維化，其中D4組表現(xiàn)最嚴重；
　　（4）肺組織轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果顯示D4組、D8組和D12組相對NC組差異表達的基因分別為163（133上調(diào)）、50（35上調(diào)）和113（78上調(diào)）個；進一步篩選了纖維化和炎癥相關(guān)基因（SCGB1A1，SCGB3A2，BPIFA1，PAI-1，IL8，IL10， IL13，TNF-α，CDH

4、1）進行了Q-PCR驗證；
　?。?）Q-PCR結(jié)果顯示氨氣刺激后SCGB1A1基因表達水平顯著下調(diào)；SCGB3A2基因在D4顯著上調(diào)，D8和D12組逐漸恢復至正常水平；TNF-α基因表達水平在D4和 D8顯著下調(diào)，D12組隨后恢復至正常水平；BPIFA1、IL8、IL10、IL13、CDH1和 PAI-1基因表達水平均沒有表現(xiàn)出顯著的變化。
　　結(jié)論：本試驗發(fā)現(xiàn)56±4 mg/m3氨氣刺激仔豬較短時間（4天），即可引起機體