氨氣對(duì)仔豬肺部結(jié)構(gòu)及纖維化相關(guān)基因表達(dá)的影響.pdf

1、冬季，保育豬舍內(nèi)由于通風(fēng)換氣和保溫的矛盾，造成豬舍內(nèi)有害氣體尤其是氨氣濃度上升，對(duì)仔豬呼吸道健康可能造成不良影響。本試驗(yàn)通過人工模擬一定濃度氨氣環(huán)境，研究了氨氣對(duì)仔豬肺部結(jié)構(gòu)及基因表達(dá)譜的影響。
　　試驗(yàn)材料和方法：選取7周齡、體重14kg長大去勢公豬12頭，隨機(jī)分為4組（NC組，D4組，D8組，D12組），每組3頭。采用56±4 mg/m3的氨氣濃度，每天刺激8小時(shí)，其中NC組不刺激，D4，D8，D12組分別連續(xù)刺激4d、8d、

2、12d。階段刺激結(jié)束，空腹12h后采集豬只外周血液進(jìn)行血常規(guī)檢測，解剖采集肺部組織制作組織切片進(jìn)行組織形態(tài)學(xué)觀察，同時(shí)提取RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序。
　　主要試驗(yàn)結(jié)果：
　　（1）氨氣刺激過程中豬只的活動(dòng)量明顯減少，基本沒有采食和飲水行為發(fā)生；
　?。?）三分類血常規(guī)結(jié)果顯示白細(xì)胞總數(shù)隨著刺激時(shí)間的延長而逐漸增多，淋巴細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞也分別出現(xiàn)了不同程度的增多；
　?。?）肺組織蘇木精伊紅（HE）染色和天狼

3、星紅（SR）染色顯示，氨氣刺激組肺組織出現(xiàn)了炎性細(xì)胞浸潤，以及不同程度細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）進(jìn)行性異常積聚和輕度的纖維化，其中D4組表現(xiàn)最嚴(yán)重；
　?。?）肺組織轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果顯示D4組、D8組和D12組相對(duì)NC組差異表達(dá)的基因分別為163（133上調(diào)）、50（35上調(diào)）和113（78上調(diào)）個(gè)；進(jìn)一步篩選了纖維化和炎癥相關(guān)基因（SCGB1A1，SCGB3A2，BPIFA1，PAI-1，IL8，IL10， IL13，TNF-α，CDH

4、1）進(jìn)行了Q-PCR驗(yàn)證；
　　（5）Q-PCR結(jié)果顯示氨氣刺激后SCGB1A1基因表達(dá)水平顯著下調(diào)；SCGB3A2基因在D4顯著上調(diào)，D8和D12組逐漸恢復(fù)至正常水平；TNF-α基因表達(dá)水平在D4和 D8顯著下調(diào)，D12組隨后恢復(fù)至正常水平；BPIFA1、IL8、IL10、IL13、CDH1和 PAI-1基因表達(dá)水平均沒有表現(xiàn)出顯著的變化。
　　結(jié)論：本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)56±4 mg/m3氨氣刺激仔豬較短時(shí)間（4天），即可引起機(jī)體