枸杞多糖防治大鼠酒精性脂肪肝的實驗研究.pdf

1、隨著飲酒人數及人均酒精消費量的增多，酒精對人體肝臟的損害日益成為一個全球性的問題。酒精性脂肪肝是最早、最常見的慢性肝損害之一，因其可逐漸發(fā)展為肝纖維化、肝硬化而危害極大。目前，酒精性肝損傷發(fā)病機制尚不完全明確，國內外亦無防治的理想藥物，因此，從分子生物學角度研究其發(fā)病機制，尋找安全有效的中藥防治AFL成為一重要課題。 乙醇通過誘導細胞色素P4502E1(CytochromeP4502E1，CYP2E1)表達及調控使反應性氧(re

2、active oxygen species，ROS)增多，進一步通過激活氧應激、增強脂質過氧化反應致肝損傷。枸杞多糖(LyciumBarbarum Polysaccharide，LBP)是寧夏枸杞的重要抗氧化成分，有報道在動物體內可清除氧自由基，抑制脂質過氧化反應，保護肝細胞。但對其防治酒精性肝損傷的分子機制研究尚不夠深入，且缺乏在酒精持續(xù)作用下能否保護肝細胞免受損傷的研究。 目的 1．建立慢性酒精性脂肪肝(AFL)大鼠

3、模型。 2．探討乙醇導致AFL的機制。 3．探討枸杞多糖(LBP)對AFL的防治效果。 4．研究LBP防治AFL的機制。 方法 1．用乙醇濃度遞增，每日分兩次灌胃10周建立大鼠慢性AFL模型。 2．取大鼠肝組織作病理切片，HE及蘇丹Ⅲ染色，行病理學觀察。 3．取大鼠血清測定肝功能酶譜：ALT、AST、γ-GT。 4．取大鼠肝組織制備肝勻漿，考馬斯亮藍測定勻漿蛋白含量，試劑盒

4、測定肝組織中脂質過氧化酶(GSH-PX、SOD活力，MDA、GSH)及H<,2>O<,2>含量。 5．采用免疫組織化學染色法、RT-PCR法、Western Blot法測定大鼠肝組織中CYP2E1基因及蛋白表達。 6．采用超高速冷凍離心機提取大鼠肝微粒體，用Nash法測定CYP3A活性，RT-PCR法測定CYP3A基因表達。 結果與結論 1．Wistar大鼠用40％(V/V)乙醇8g/Kg.d灌胃至5周末

5、，增加至50％(V/V)9g/Kg.d灌胃至10周末，可成功制備慢性AFL大鼠模型，且死亡率較低(約13％-17％)，穩(wěn)定性較好。 2．乙醇能明顯升高ALT、AST、γ-GT，并通過誘導CYP2E1基因及蛋白表達，誘導CYP3A活性及基因表達，增強脂質過氧化反應，降低GSH-PX、SOD活力和GSH含量，增加MDA、H2O2含量，損害肝細胞，導致肝臟脂肪變性。 3．LBP通過抑制CYP2E1及CYP3A表達，減輕脂質過氧