消瘀化痰飲對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠肝細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：消瘀化痰飲(由澤瀉、制半夏、丹參、郁金、柴胡、決明子、生黃芪、炒白術(shù)等組成)具有消痰化瘀、健脾疏肝功效，為導(dǎo)師臨床觀察篩選的效方，對(duì)非酒精性脂肪肝(NAFLD)具有較好的治療效果，為了進(jìn)一步探討其作用機(jī)理，參照相關(guān)文獻(xiàn)用高脂飼料喂飼大鼠復(fù)制NAFLD大鼠模型，同時(shí)施加藥物干預(yù)，通過(guò)觀察其對(duì)膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)的影響，探討了本方在調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝

2、和保護(hù)肝功能方面的作用機(jī)制；通過(guò)觀察其對(duì)細(xì)胞凋亡及相關(guān)調(diào)控基因Bcl-2、Bax和caspase3蛋白表達(dá)的影響，探討了其抗細(xì)胞凋亡的作用機(jī)制。并運(yùn)用光鏡和電鏡觀察了本方對(duì)肝臟組織形態(tài)學(xué)的影響。 方法 第一部分消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝和肝組織形態(tài)學(xué)的影響選用SD大鼠50只，體重160～180g，雄性。大鼠自由飲水進(jìn)食，飼養(yǎng)于18℃～22℃明暗各12小時(shí)的清潔級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室內(nèi)。正常喂養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為5組：正常對(duì)照

3、組(簡(jiǎn)稱正常組)、模型對(duì)照組(簡(jiǎn)稱模型組)、消瘀化痰飲高劑量組(簡(jiǎn)稱高劑量組)、消瘀化痰飲低劑量組(簡(jiǎn)稱低劑量組)、陽(yáng)性藥(東寶甘泰)對(duì)照組(簡(jiǎn)稱對(duì)照組)。第二部分消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠肝細(xì)胞凋亡及相關(guān)調(diào)控基因的影響實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組、用藥情況同前。連續(xù)灌胃9周，確定脂肪肝形成后，于最后一次給藥禁食12h后麻醉動(dòng)物，剖取肝臟，在肝臟最大葉距邊緣0.5cm處取少許肝組織，剪碎至1mm3大小，然后置于100目銅網(wǎng)上輕搓，邊搓邊以生理鹽水沖洗，

4、直至將組織搓完。收集細(xì)胞懸液，離心2min，棄去上清，去除細(xì)胞碎片，70％乙醇固定，運(yùn)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)實(shí)驗(yàn)大鼠肝細(xì)胞增殖與凋亡及相關(guān)調(diào)控基因Bcl-2、Bax和Caspase3蛋白表達(dá)的情況。 結(jié)果： 第一部分消瘀化痰飲對(duì)NAFLD大鼠脂質(zhì)代謝和肝組織形態(tài)學(xué)的影響1各組大鼠血清TG、TC、FFA的含量變化模型組大鼠血清TG、TC、FFA的含量(1.17±0.096、3.27±0.18、480.475±18.94)明顯高于

5、正常組(0.56±0.084、 第二部分消瘀化痰飲對(duì)非酒精性脂肪肝大鼠肝細(xì)胞凋亡及相關(guān)調(diào)控基因的影響1各組大鼠肝細(xì)胞凋亡率的變化流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示：正常組肝臟細(xì)胞的凋亡率為(11.1±0.51)，模型組為(31.44±1.12)，模型組顯著高于正常組(P<0.01)；消瘀化痰飲高、低劑量組與陽(yáng)性藥對(duì)照組分別為(15.43±0.70、17.29±0.83、20.41±0.88)，均比模型組有了明顯的下降(P<0.01)。 2各

6、組大鼠肝細(xì)胞增殖周期的變化模型組G0/G1期(81.63±5.85)細(xì)胞百分率較正常組(75.71±4.24)升高(P<0.01)；而S期(11.51±1.85)和G2/M期(7.15±0.51)細(xì)胞百分率均較正常組(14.78±1.12、9.34±0.65)降低(P<0.05)。經(jīng)用藥干預(yù)后，高、低劑量組及對(duì)照組G0/G1期(73.17±6.70、74.54±4.98、75.56±2.54)細(xì)胞百分率明顯低于模型組(P<0.01)；而

7、高、低劑量組及對(duì)照組S期(15.21±1.93、15.34±1.42、13.69±1.70)和G2/M期(11.62±1.09、11.39±1.22、11.12±1.18)細(xì)胞百分率顯著高于模型組的S期(11.51±1.85)和G2/M期(7.15±0.51)，(P<0.05或P<0.01)。高、低劑量組與對(duì)照組之間各項(xiàng)指標(biāo)變化無(wú)明顯差異(P>0.05)。 模型組細(xì)胞增殖指數(shù)(18.61±1.96)較正常組(24.12±2.19

8、)降低(P<0.01)；經(jīng)用藥干預(yù)后，高、低劑量組及對(duì)照組的細(xì)胞增殖指數(shù)(26.84±2.11、26.74±2.58、24.81±2.54)較模型組明顯增高(P<0.01)，表明各治療組細(xì)胞增殖速度高于模型組。其中，高、低劑量組細(xì)胞增殖指數(shù)均高于對(duì)照組(P<0.05)，但高、低劑量組之間無(wú)明顯差異(P>0.05)。 結(jié)論 1消瘀化痰飲能顯著降低實(shí)驗(yàn)大鼠血清和肝組織內(nèi)異常升高的TC、TG、FFA的含量，抑制血清內(nèi)ALT和

9、AST活性的異常升高，具有良好的調(diào)脂護(hù)肝作用。 2消瘀化痰飲可明顯改善NAFLD大鼠肝組織的病變程度，表現(xiàn)為用藥后大鼠肝小葉和肝血竇結(jié)構(gòu)清晰，肝細(xì)胞內(nèi)脂滴空泡基本消失；線粒體形態(tài)基本恢復(fù)正常。 3消瘀化痰飲可使NAFLD大鼠肝組織的Bcl-2基因蛋白表達(dá)量增加，Bax和Caspase3基因蛋白表達(dá)量降低，細(xì)胞凋亡率下降，肝組織中靜止期細(xì)胞減少，而增殖期細(xì)胞增多，非增殖型細(xì)胞向增殖型轉(zhuǎn)化，說(shuō)明消瘀化痰飲可使細(xì)胞DNA合成加