人肝細(xì)胞癌靶向脂質(zhì)體超聲造影劑的制備及其顯像研究.pdf

1、肝細(xì)胞癌(HCC)是世界上較常見且惡性程度很高的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率和死亡率呈逐年升高的趨勢，嚴(yán)重威脅人類的健康和生命，但其早期定性定位診斷仍然非常困難。超聲造影劑及相關(guān)技術(shù)的發(fā)展使人們對超聲造影在診斷肝臟腫瘤中的作用有了更進(jìn)一步地了解，但目前用于肝臟腫瘤研究的超聲造影劑是一種無定向選擇作用的全身性造影劑。研究發(fā)現(xiàn)[1,2]，抗人肝細(xì)胞癌單克隆抗體對肝細(xì)胞癌組織有很高的特異性，能選擇性定位于癌組織。設(shè)想若以該抗體為導(dǎo)向載體制備靶向造影

2、劑，則可使造影劑以更高的濃度聚集在靶組織，達(dá)到定向顯影的目的。 目的：在本科實驗室研制脂質(zhì)體超聲造影劑“脂氟顯”的基礎(chǔ)上[3]，引入抗人肝細(xì)胞癌單克隆抗體導(dǎo)向技術(shù)，制備對HCC具有特異靶向作用的免疫脂質(zhì)體超聲造影劑，在體外對其免疫學(xué)性質(zhì)進(jìn)行鑒定，并探討該造影劑對荷人肝癌裸鼠腫瘤的特異增強顯像效果。 方法：1.采用靜電吸附法將抗人肝細(xì)胞癌單克隆抗體HAb18結(jié)合到脂質(zhì)體微泡表面，制備靶向脂質(zhì)體微泡造影劑；玻片凝集實驗、熒光

3、免疫染色實驗證明抗體與脂質(zhì)體微泡的結(jié)合；花環(huán)形成實驗、花環(huán)形成阻斷實驗及熒光免疫染色實驗研究靶向脂質(zhì)體微泡的體外尋靶作用；ELISA法檢測靶向脂質(zhì)體微泡上結(jié)合抗體的活性；細(xì)胞毒實驗(MTT法)評價靶向脂質(zhì)體微泡的安全性。 2.HHCC人肝癌細(xì)胞株體外培養(yǎng)傳代，BALB/c-nu裸小鼠皮下接種，建立荷人肝癌裸鼠動物模型。分別用靶向脂質(zhì)體超聲造影劑或普通脂質(zhì)體超聲造影劑經(jīng)荷肝癌裸鼠尾靜脈注射超聲造影(ICU)，采用二次諧波顯像模式(

4、SHI)，利用目測觀察和視頻灰階分析技術(shù)，結(jié)合時間-強度曲線(TIC)來定量評價腫瘤的增強顯像效果。 結(jié)果：1.靶向脂質(zhì)體微泡的玻片凝集實驗、熒光免疫染色實驗均為陽性；ELISA結(jié)果顯示，靶向脂質(zhì)體微泡中單抗的活性與游離單抗基本一致；靶向脂質(zhì)體微泡圍繞人肝癌細(xì)胞HHCC形成花環(huán)，而對照細(xì)胞未見花環(huán)形成；靶向脂質(zhì)體微泡造影劑對人正常肝細(xì)胞的增殖沒有影響。 2.成功建立了人肝癌裸鼠動物模型，經(jīng)荷人肝癌裸鼠尾靜脈注入靶向脂質(zhì)體

5、超聲造影劑或普通脂質(zhì)體超聲造影劑后對比觀察，靶向造影劑組腫瘤在目測上回聲有逐漸增強趨勢，呈延遲增強表現(xiàn)，各實驗鼠腫瘤增強程度有一定差異，體積較小腫瘤增強效果較為明顯。視頻定量分析靶向造影劑組腫瘤的增強顯影約在8min達(dá)到峰值，峰值灰階值為39.545±10.099dB；普通造影劑組腫瘤增強顯影達(dá)峰值時間約為10s，峰值灰階值為22.438±5.108dB，與靶向造影劑造影后灰階峰值比較相差顯著(P＜0.01)。 結(jié)論：采用靜電吸