硬脂酸和花生四烯酸對實驗性缺血缺氧的神經(jīng)保護作用.pdf

1、目的 （1）評價硬脂酸（stearic acid, SA）與花生四烯酸（arachidonic acid, AA）對原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)細胞或大鼠海馬腦片的神經(jīng)保護作用。（2）探討過氧化物酶體增值體激活物受體（peroxisome proliferator-activated receptors, PPARs）與脂肪酸(PPARs內(nèi)源性配體) 的神經(jīng)保護作用之間的聯(lián)系。（3）研究硬脂酸與花生四烯酸對谷氨酸興奮性毒性損傷過程中的谷氨酰胺

2、合成酶水平、谷氨酸攝取以及N-甲基-D-天冬氨酸（NMDA）誘發(fā)電流的影響。 方法 （1）分別在細胞水平和腦片水平上制備缺氧缺糖損傷、過氧化氫損傷以及谷氨酸損傷，利用MTT染色或TTC染色，結(jié)合酶標儀技術(shù)，檢測硬脂酸（3-30μM）和花生四烯酸（3-30μM）對三種模型損傷的大鼠海馬細胞活性或腦片組織活性的影響。（2）PPARα的抑制劑MK886（5μM）和PPARγ抑制劑BADGE（100μM）與細胞共孵育，利用MTT染色或T

3、TC染色研究MK886或BADGE對脂肪酸保護作用的影響。（3）對SD大鼠進行雙側(cè)頸動脈結(jié)扎手術(shù)，利用谷氨酰胺酶試劑盒檢測3mg/kg硬脂酸和3mg/kg花生四烯酸對大鼠海馬腦區(qū)谷氨酰胺合成酶活性的影響；利用[3H]-D, L-谷氨酸作谷氨酸攝取實驗，使用液閃儀等檢測硬脂酸（3-30μM）或花生四烯酸（3-30μM）對原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)細胞的谷氨酸攝取能力的影響；利用膜片鉗實驗，檢測硬脂酸（3-30μM）或花生四烯酸（3-30μM

4、）對NMDA誘發(fā)電流的影響。 結(jié)果 （1） MTT染色和TTC染色實驗顯示：硬脂酸 （3-30μM）或花生四烯酸 （3- 30μM）能夠顯著提高缺氧缺糖損傷或過氧化氫損傷中的細胞活力（p<0.01），提高谷氨酸損傷中的細胞活力（p<0.05）。（2）細胞實驗結(jié)果顯示，缺氧缺糖損傷和過氧化氫損傷中，PPARα抑制劑MK886顯著抑制脂肪酸的神經(jīng)保護作用（p<0.01）；谷氨酸損傷中，BADGE顯著抑制脂肪酸的神經(jīng)保護作用（p<0.

5、01）；腦片實驗結(jié)果顯示：三種損傷中，BADGE不同程度得抑制脂肪酸的神經(jīng)保護作用。（3）硬脂酸 （3mg/kg）和花生四烯酸（3mg/kg）顯著升高短期（30min）雙側(cè)頸動脈結(jié)扎手術(shù)的大鼠海馬腦區(qū)的谷氨酰胺合成酶水平（p<0.01）, 并不同程度的降低長期（6h）雙側(cè)頸動脈結(jié)扎手術(shù)的大鼠海馬腦區(qū)谷氨酰胺合成酶水平；硬脂酸（30μM）明顯升高原代培養(yǎng)的大鼠海馬神經(jīng)細胞的谷氨酸攝取率（p<0.05），并能夠明顯抑制急性打散的大鼠海馬細胞