基于GNPs-SiNRs試紙條的大田軟海綿酸快速檢測技術研究.pdf

1、腹瀉性貝類毒素(DSP)是全世界分布最廣泛的海洋赤潮毒素，其主要成分為大田軟海綿酸（OA）及其衍生物。貝類等海洋生物濾食有毒藻類后，DSP便在生物體內(nèi)富集。若人類食用了這種經(jīng)貝類毒素污染的海洋生物后，會出現(xiàn)如腹瀉、惡心、嘔吐等腹瀉性貝毒綜合癥狀。DSP毒素毒性強，中毒癥狀明顯，且毒素熱穩(wěn)定性強，煮沸也難以去除，為了保障消費者的生命安全，需要研究一種靈敏、快速的現(xiàn)場檢測方法以實現(xiàn)對DSP的有效監(jiān)控。免疫試紙條生物傳感器正逐漸被廣泛應用于各

2、類毒素的快速篩查。與其他檢測方法相比，免疫試紙條生物傳感器具有以下優(yōu)點：不需復雜的樣品預處理過程，結(jié)果直觀并且可視化，信號響應時間短以及儀器設備可小型化等。本論文主要研究以毒素抗體做為生物識別元素，同時結(jié)合增敏型的納米復合材料作為生物標記物，構(gòu)建基于納米復合材料的免疫試紙條生物傳感器，采用競爭法識別機理，實現(xiàn)了對腹瀉性貝類毒素（大田軟海綿酸）的高靈敏的檢測研究。同時，利用所構(gòu)建的毒素識別平臺，對市場上銷售的部分貝類產(chǎn)品進行貝毒污染的測試

3、。
　　本論文的主要內(nèi)容包括：
　?。?）研究制備膠體金-納米二氧化硅（GNPs-SiNRs）復合材料，通過比較膠體金的表面覆蓋率和負載量，以及比較納米復合物在水溶液中的穩(wěn)定性（是否容易聚沉），選擇最佳的膠體金-納米二氧化硅作為抗體標記物，采用物理吸附方法實現(xiàn)抗體在納米復合材料表面的固定化。構(gòu)建基于納米復合材料材料的免疫試紙條生物傳感器，同時對傳感器的工作條件進行優(yōu)化（GNPs-SiNRs與抗體結(jié)合的最適pH值、GNPs-S

4、iNRs中加入抗體的量等），用以降低非特異性吸附，提高檢測靈敏度。
　?。?）研究檢測試紙條傳感器的分析檢測性能，并實現(xiàn)了對貝類實際樣品的高靈敏的檢測。在最優(yōu)試驗條件下（GNPs-SiNRs與抗體結(jié)合的最適pH為9.0、GNPs-SiNRs中抗體濃度為1μg/mL等），試紙條響應信號的強度與目標毒素標準品的濃度在15.5-100 ng/mL范圍內(nèi)有良好的線性關系，檢測限為15.5 ng/mL。該試紙條在常溫下保存1個月后，對目標毒

5、素的響應信號的變化為10％以內(nèi)，表現(xiàn)出了良好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性；該試紙條對于其他非目標毒素（如黃曲霉毒素、石房蛤毒素等）并沒有明顯的響應信號的變化，展現(xiàn)了其良好的特異性。在貝類實際樣品的檢測中，試紙條響應信號的強度與復雜基質(zhì)中的目標毒素濃度在16.8~100 ng/mL范圍內(nèi)有良好的線性關系，檢測限為16.8 ng/mL，其結(jié)果與標準品的檢測結(jié)果類似，說明該試紙條在復雜基質(zhì)的環(huán)境中仍然對目標毒素保持良好的選擇性，并且受其他干擾較小。同時，