基于熒光適配體試紙條的黃曲霉毒素B1快速檢測技術研究.pdf

1、傳統(tǒng)的黃曲霉毒素B1(AFB1)儀器分析方法，樣品前處理步驟復雜、耗時長、不適合現(xiàn)場操作，而基于抗原抗體的膠體金免疫層析法雖然簡單靈敏，但成本較高，且需要低溫儲運。核酸適配體試紙條是一種以核酸適配體結合側向層析技術而研發(fā)的快速檢測方法，在藥物分析、食品安全、疾病診斷等領域都展現(xiàn)了很好的應用前景。目前核酸適配體試紙條一般采用適配體互補鏈競爭方式，由于核酸互補結合力常常大于適配體與靶標結合力，在適配體試紙條開發(fā)過程中，經(jīng)常遇到核酸適配體的互

2、補鏈選擇困難問題。
　　實驗通過檢測線（T線）處固定抗原代替互補鏈，此時適配體/靶標與適配體/抗原具有相同的結合力，用此同等競爭原理的思路解決了互補鏈選擇困難問題，并且在控制線（C線）處固定適配體的全長互補鏈，競爭已經(jīng)與靶標結合的適配體，形成T線/C線處雙競爭模式，大大提高了檢測的靈敏度與準確性。實驗主要進行了以下幾個方面的內容:
　　1、論文首先設計了一種利用Cy5標記的適配體檢測AFB1的試紙條，分別對各組件樣品墊、硝酸

3、纖維素膜(NC膜)、吸水墊和PVC底板進行了詳細的優(yōu)化選擇。最后選擇出一套適合熒光適配體試紙條的組件方案，即樣品墊:上海杰一GL-b04型號（厚度為0.75）;NC膜:SartoriusCN140;吸水墊:H-4型號（厚度為0.3 mm）;底板:J-A6型號。組件的選擇試驗為試紙條獲得高精確結果奠定了基礎。
　　2、通過優(yōu)化檢測條件與步驟，建立了AFB1熒光適配體試紙條檢測的方法。最后選擇結合性能好的AFB1-BSA抗原作為T線處

4、的固定物，固定最佳濃度為252μg/mL;選擇結合性能好的適配體完全互補序列作為C線處的固定物，固定最佳濃度為3μM;選擇結合性能好的12個Poly(A)長度連接臂的熒光適配體，適配體最佳濃度為0.01μM; running buffer為含7.5％ BSA的PB緩沖液(pH=7.4)。
　　3、完成適配體試紙條檢測性能的評價。試紙條的檢測限為0.1 ng/mL，檢測范圍為0.1-1000ng/mL，批間批內穩(wěn)定性好，對于其它霉菌