維胃方對(duì)大鼠胃潰瘍的治療作用及胃粘膜PGE-,2-含量的影響.pdf

1、課題背景: 消化性潰瘍的西醫(yī)藥物治療主要采取抗Hp感染、抑制胃酸和保護(hù)胃黏膜的原則。目前質(zhì)子泵抑制劑（PPI）和H2受體拮抗劑（H2R），仍為PU治療的主線藥物。這兩類藥物近期愈合效果較好，但停藥后潰瘍年復(fù)發(fā)率達(dá)60%～80%，是影響PU療效的一大難題。因此，藥物療法是目前國(guó)外對(duì)PU研究的熱點(diǎn)之一。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)學(xué)者大量開(kāi)展了中醫(yī)藥治療消化性潰瘍的實(shí)驗(yàn)研究和臨床研究，顯示出傳統(tǒng)醫(yī)藥在有效根除Hp、增強(qiáng)胃粘膜防御能力、提高愈合質(zhì)量、

2、減少?gòu)?fù)發(fā)、不良反應(yīng)少、經(jīng)濟(jì)簡(jiǎn)便、依從性好、無(wú)明顯耐藥性及毒副作用等方面的優(yōu)勢(shì)。 維胃方是導(dǎo)師臨床上治療消化性潰瘍的經(jīng)驗(yàn)方，由白及、三七、茯苓、蒲公英組成，療效較好。本研究以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，臨床療效為依據(jù)，采用維胃方對(duì)胃潰瘍大鼠進(jìn)行治療，通過(guò)檢測(cè)胃液pH值、潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率，觀察胃潰瘍的大體愈合情況及造模處黏膜病理切片結(jié)果，并用放射性免疫分析方法（RIA）測(cè)定胃黏膜PGE2的含量作為切入點(diǎn)，綜合觀察本方對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍的治療作用

3、，尋找它們之間的量效關(guān)系，揭示其臨床療效機(jī)理，為進(jìn)一步中藥開(kāi)發(fā)和臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法: 1．SPF級(jí)Wistar雄性大鼠，（200±20）g/只，按完全隨機(jī)法分為8組，每組8只：正常組；模型組；自愈組；用藥組（雷尼替丁組；奧美拉唑組；維胃方高劑量組；維胃方中劑量組；維胃方低劑量組）。正常組予正常飲食；模型組在造模3天后處死；自愈組觀察自愈情況，在造模3天后正常飲食，與用藥組同時(shí)處死；用藥組在造模3天后給予相應(yīng)

4、藥物灌胃（1ml/100g體重），1次/日，灌胃7天后處死。除正常組外，對(duì)余各組大鼠進(jìn)行冰醋酸致胃潰瘍模型的制作；造模前24小時(shí)禁食不禁水，經(jīng)腹腔注射10%水合氯醛麻醉，于劍突下腹中線剪-2cm切口，將胃移出腹腔，在胃前壁竇體交接處靠胃竇側(cè)漿膜面，用100%冰醋酸浸泡直徑5mm的濾紙壓貼60s。還納胃體，逐層縫合，75%酒精消毒傷口。采集標(biāo)本前大鼠24小時(shí)禁食不禁水，具體步驟如下：①稱重，10%水合氯醛腹部麻醉后備毛，固定；②10%甲醛

5、溶液10ml由賁門注入胃腔，結(jié)扎賁門，固定30分鐘；③沿胃大彎剪開(kāi)胃，展開(kāi)鋪平，沖洗胃內(nèi)壁，于造模處尋找潰瘍面，觀察胃黏膜大體標(biāo)本情況。用游標(biāo)卡尺測(cè)量潰瘍的最大長(zhǎng)徑和最大短徑，將兩者的乘積作為潰瘍指數(shù)（UI）。④取部分潰瘍周圍組織放入含10%甲醛溶液中固定，經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色后置光學(xué)顯微鏡下觀察胃粘膜組織病理學(xué)情況。 2．實(shí)驗(yàn)對(duì)象的選取、分組及造模、給藥同前。采集標(biāo)本前大鼠24小時(shí)禁食不禁水，步驟如下：①大鼠用

6、10%水合氯醛麻醉，劍突下剪開(kāi)腹腔，剝離胃，結(jié)扎幽門，于十二指腸和食管處剪斷取胃，由賁門擠胃液于PH試紙上檢測(cè)。②用玻片將新鮮腺胃部的胃粘膜組織刮下，研磨制成勻漿，放入高速離心機(jī)（3500rpm，15 min，4℃）離心，吸取上清液1ml，放-20℃保存，采用放免法（RIA）測(cè)定PGE2。 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法: 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，采用SPSS13．0軟件進(jìn)行單因素方差分析法（One-way ANOVA）的樣本均數(shù)多重比較分析

7、。若存在差異，采用Levene檢驗(yàn)進(jìn)行方差一致性檢驗(yàn)；若方差齊性，各組間存在差異，采用Least-significant difference （LSD）法檢驗(yàn)；若方差不齊性，用Welch檢驗(yàn)，各組間存在差異，采用Dunnett's T3檢驗(yàn)；P<0．05為差異顯著。 主要結(jié)果: 1、胃黏膜大體標(biāo)本觀察 正常組：胃黏膜完整光滑，未見(jiàn)潰瘍、糜爛、充血及出血點(diǎn)。模型組：黏膜充血明顯，有條狀及點(diǎn)狀出血，可見(jiàn)潰瘍?cè)罴靶∑訝€。

8、自愈組：愈合不良，見(jiàn)明顯潰瘍面，粘膜充血明顯，見(jiàn)點(diǎn)狀出血，組織粘連較明顯。雷尼替丁組：愈合較好，部分可見(jiàn)潰瘍面，偶見(jiàn)充血或糜爛點(diǎn)，漿膜面少許粘連。奧美拉唑組：粘膜基本完整光滑，未見(jiàn)潰瘍、糜爛及明顯的出血點(diǎn)，局部有小粘連。維胃方高、中、低劑量組：絕大部分愈合良好，粘膜基本完整光滑，僅見(jiàn)個(gè)別小潰瘍點(diǎn)或小范圍瘢痕增生，未見(jiàn)潰瘍、糜爛及明顯的出血點(diǎn)，局部有組織小粘連。 2、潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率的變化模型組UI，與正常組比較差異顯著（P=

9、0．003），與自愈組比較無(wú)顯著性差異（P=0．237）；維胃方能明顯降低潰瘍指數(shù)（P<0．05），以中劑量效果最佳（P=0．001）；中劑量組與雷尼替丁組存在顯著差異（P=0．002），與奧美拉唑組無(wú)顯著差異（P=0．562）；高、低劑量組與雷尼替丁組無(wú)差異（P>0．05）。表明維胃方中劑量組治療效果優(yōu)于雷尼替丁組。維胃方三個(gè)劑量組的潰瘍抑制率均低于奧美拉唑組（89．67%），但均高于雷尼替丁組（53．51%）。 3、病理切片

10、鏡下觀察正常組：胃黏膜層、肌層完整連續(xù)，腺體排列緊密，未見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)及出血傾向。模型組：粘膜結(jié)構(gòu)失去完整性及連續(xù)性，各層細(xì)胞排列紊亂，缺損直達(dá)肌層，粘膜下層毛細(xì)血管內(nèi)可見(jiàn)明顯的血流瘀滯，可見(jiàn)大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。自愈組：黏膜缺損較大，腺細(xì)胞排列紊亂，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，見(jiàn)瘢痕纖維生成，偶見(jiàn)血栓。雷尼替丁組：見(jiàn)新生的胃上皮細(xì)胞覆蓋，有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，較模型組、自愈組少，見(jiàn)少量血栓，肌層細(xì)胞排列較紊亂。奧美拉唑組：各層結(jié)構(gòu)排列尚整齊，粘膜上皮層

11、基本完整連續(xù)，未見(jiàn)壞死組織及出血，未見(jiàn)明顯炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，接近正常組。維胃方高、低劑量組見(jiàn)小部分缺損達(dá)腺細(xì)胞層，偶及肌層，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少；而高劑量組黏膜愈合相對(duì)較好，腺體細(xì)胞增生數(shù)量較多，排列較整齊，未見(jiàn)血栓。維胃方中劑量組黏膜基本完整，腺體形態(tài)基本修復(fù)，炎性細(xì)胞較少，黏膜下循環(huán)未見(jiàn)明顯病理狀態(tài)，故潰瘍愈合情況較好，較接近正常組及奧美拉唑組。 4、胃液pH值的變化與用藥組相比，自愈組胃液pH值顯著下降（P<0．05），模型組下降

12、更顯著（P<0．01），模型組pH值顯著低于正常組（P=0．000）。與模型、自愈組比較，維胃方能顯著升高胃液pH值（P<0．05），接近雷尼替丁、正常組水平（P>0．05）。奧美拉唑組pH值顯著高于各組（P<0．01）；維胃方能抑制胃酸分泌，并呈劑量依賴關(guān)系，以高劑量組抑酸效果更顯著。 5、胃黏膜PGE2變化與模型組比較，維胃方可顯著增加胃粘膜PGE2含量（P<0．05），以高劑量組最明顯（P=0．004）；高劑量組與奧美拉唑

13、組無(wú)顯著意義（P=1．000），中、低劑量組與雷尼替丁組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）；自愈組與用藥組比較差異顯著（P<0．05），且與奧美拉唑、高劑量組差異最顯著（P<0．01）。 結(jié)論: 1．實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍大鼠自愈率較高，往往影響藥物療效的觀察。冰醋酸造模法是直接以冰醋酸燒灼胃漿膜面形成潰瘍，其表現(xiàn)和潰瘍愈合速度與人類潰瘍極為相似，方法簡(jiǎn)單，操作性、可行性較強(qiáng)，是目前普遍認(rèn)可與使用的方法。本實(shí)驗(yàn)采用此慢性胃潰瘍經(jīng)典模型，

14、對(duì)觀察維胃方促進(jìn)潰瘍愈合的效果更具說(shuō)服力。 2．從大體標(biāo)本觀察情況來(lái)看，用藥組潰瘍面愈合的情況與自愈組有明顯區(qū)別，尤其是維胃方高、中劑量組及奧美拉唑組，愈合效果均優(yōu)于其他組別。 3．從潰瘍指數(shù)及潰瘍抑制率的結(jié)果看，造模成功率高達(dá)100%。與正常組比較，模型組UI顯著上升（P=0．003），表明造模成功；模型組與自愈組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0．237），說(shuō)明本實(shí)驗(yàn)的胃潰瘍大鼠自愈效果差；維胃方能顯著降低潰瘍指數(shù)（P<0．0

15、5），以中劑量效果最佳（P=0．006）；這與病理鏡下的觀察結(jié)果一致，表明該模型是研究藥物治療GU的理想模型。 4．從組織病理觀察情況看，維胃方中劑量、奧美拉唑組更接近正常組，腺體形態(tài)基本修復(fù)，炎性細(xì)胞較少，恢復(fù)情況較好；而模型組破壞較嚴(yán)重，缺損可及肌層，造模處腺體完全破壞，非造模處炎性細(xì)胞浸潤(rùn)嚴(yán)重、腺體變形，下循環(huán)病理改變明顯。 5．從胃液pH值的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果中可以看出：模型組和自愈組胃液pH值較正常組顯著下降（P<0

16、．01），說(shuō)明冰醋酸造模后胃酸增加而引發(fā)胃潰瘍。潰瘍程度越嚴(yán)重，抑制胃酸功能越差，胃液pH值越低（模型組2．49±0．29）。維胃方三個(gè)劑量組均能顯著升高胃液pH值（P<0．01），與正常組（3．44±0．35）和雷尼替丁組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0．05）。表明維胃方能抑制胃酸分泌，減弱攻擊因子的作用，其療效與雷尼替丁相似。 6．測(cè)定胃黏膜PGE2含量的結(jié)果反映出：冰醋酸致大鼠胃潰瘍后，模型組胃黏膜PGE2顯著減少（84．65±17

17、．01 pg/ml），自愈組PGE2亦顯著減少（115．89±25．12 pg/ml）；經(jīng)維胃方治療后PGE2顯著增加，對(duì)胃潰瘍愈合效果是明顯的（P<0．05），以高劑量組最顯著（P=0．004）。數(shù)據(jù)中維胃方中、低劑量組更接近雷尼替丁組水平（P>0．05），其中維胃方高劑量組（251．64±70．17 pg/ml）與奧美拉唑組（296．49±128．59 pg/ml）最接近（P=1．000）。提示維胃方對(duì)實(shí)驗(yàn)性胃潰瘍有較好的修復(fù)治療作