維胃方對胃潰瘍大鼠胃黏膜氨基己糖含量影響的實驗研究.pdf

1、消化性潰瘍（peptic ulcer，PU）是一種臨床上常見的慢性復發(fā)性疾病。近年來胃黏膜保護劑、H2受體拮抗劑（H2R）和質子泵抑制劑（PPI）的應用及標準的抗HP治療使近期療效明顯提高，但潰瘍復發(fā)仍難以避免，停藥后1年復發(fā)率約30%～50%[2]，且由于費用、副作用、病人依從性差等問題的存在，使該病的復發(fā)率居高不下，因此尋找并開發(fā)治療PU的天然藥物成為當前迫切而重要的任務。 消化性潰瘍的發(fā)病機理復雜，目前被廣泛接受的是攻擊因

2、子和防御機制平衡學說。胃黏膜的疏水性具有重要的保護防御意義，在潰瘍的發(fā)生、發(fā)展和復發(fā)過程中都起著十分重要的作用。胃黏膜的疏水性強，則胃黏膜的防御能力較強，則潰瘍容易愈合，不易復發(fā)；反之，則潰瘍容易產生，難以治愈，即使短期治愈，也容易復發(fā)。胃黏膜疏水性的物質基礎是由黏液凝膠內脂類物質（主要為磷脂）和糖蛋白（主要為氨基己糖）組成。研究證明：氨基己糖含量與潰瘍指數(shù)呈負相關，和反映粘膜完整性的胃粘膜跨膜電位呈正相關，氨基己糖含量的變化已成為廣泛

3、用于判斷胃粘膜損傷和藥物療效的重要參數(shù)之一。 維胃方是導師治療消化性潰瘍的經驗方，由茯苓、蒲公英、白及、三七組成，該方以健脾和胃，通絡止痛為法，臨床效果良好。為觀察該方治療潰瘍的療效并進一步探討其治療作用機制，本課題在以往研究的基礎上，采用適合觀察藥物治療效果的乙酸致大鼠GU模型，用分光光度比色法測定胃黏膜氨基己糖含量，同時觀察GU的大體愈合情況、測胃液PH值、觀察病理組織切片，以闡明臨床療效機理，旨在從胃黏膜防御機制方面探討維

4、胃方對胃潰瘍的治療作用，為維胃方進一步的應用開提供實驗依據(jù)。 實驗方法: 1.動物分組及給藥 雄性SPF級Wistar大鼠56只，體重180-220g，根據(jù)完全隨機法分7組，每組8只：正常組，正常飲食；模型組與自愈組，冰乙酸造模術后自由飲食；維胃方高、中、低劑量組、雷尼替丁組，均于造模術后第4天開始分別灌服各劑量維胃方、雷尼替丁混懸液（1ml/100g體重），每日1次，共7天，同時正常飲食。模型組造模后第4天處死

5、取材；其余各組大鼠在造模后第11天處死取材。 2.制備大鼠胃潰瘍模型 造模方法參照經典冰醋酸法[3]，并加以改造。大鼠造模前24小時禁食不禁水。按3.5ml/kg體重經腹腔內注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹部備皮、酒精消毒，鋪上手術洞巾，自劍突下沿腹中線剪一2cm縱形切口，將胃體移出腹腔，用直徑約5mm的圓形濾紙，蘸100%冰醋酸貼于胃竇前壁1min后還納胃體，縫合腹肌、皮膚，縫合線處及其周圍再次消毒。 3.取材及

6、指標檢測 處死大鼠后取出胃，立即測定胃液PH值，然后結扎賁門及幽門，10%甲醛溶液10ml由賁門注入胃腔，固定10分鐘，剪開胃大彎，觀察胃潰瘍的大體愈合情況；取部分潰瘍周圍5mm處組織放入含10%甲醛溶液中固定12～16h（4℃），經常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片、HE染色后置光學顯微鏡下觀察胃粘膜組織病理學情況；用玻片將剩余腺胃部胃黏膜組織及黏液輕輕刮下，低溫冷凍后稱重，置于2ml生理鹽水中，按常法制備成勻漿，置玻璃試管中，3000

7、r/min離心10min，取上清液儲于-20℃，分別用于測定蛋白和氨基己糖含量。 統(tǒng)計學處理: 本實驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（X±S）表示，使用SPSS13.0軟件進行統(tǒng)計分析。多樣本均數(shù)比較用單因素方差（One-way ANOVA）分析。組間均數(shù)兩兩比較若方差齊性，用Least-significant difference（LSD）法；若方差不齊性，用Tamhane's T2方法。P≤0.05為差異顯著性標準。 結

8、果: （一）胃液PH值的變化模型組大鼠胃液PH值明顯高于正常組（P<0.01）。維胃方中劑量組與正常組比較差別無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。雷尼替丁組與模型組比較有顯著性差異（P<0.05）。維胃方各劑量組與雷尼替丁組比較，無顯著性差異（P>0.05）。 （二）大體標本觀察正常組大鼠胃粘膜光整完好，無充血、水腫、糜爛等。模型組大鼠胃粘膜漿膜層充血水腫，表面可見少量淡咖啡色物質，粘膜充血、水腫、糜爛，多處點狀或線狀出血點和

9、潰瘍。自愈組大鼠胃粘膜愈合不良，見明顯潰瘍面，粘膜充血明顯，見點狀出血，組織粘連較明顯。維胃方高、中劑量組大鼠胃粘膜絕大部分愈合良好，表面光滑，輕度瘀血，僅見個別小潰瘍點或小范圍瘢痕增生；低劑量組大鼠胃粘膜輕度充血水腫，尚存在線狀出血點或較小潰瘍，瘀血較為明顯，局部有組織小粘連。雷尼替丁組大鼠胃粘膜表面光滑，輕度瘀血，未見潰瘍，僅見少量出血點，漿膜面少許粘連。 （三）光學顯微鏡下觀察正常對照組大鼠胃粘膜層光整完好，腺體排列整齊，

10、未見炎細胞浸潤及粘膜下出血傾向。模型組大鼠胃粘膜部分中斷，潰瘍表面覆蓋大量紅細胞，潰瘍處腺體完全破壞，對應固有層和粘膜下層毛細血管內可見少量瘀血，部分毛細血管破裂出血及滲出；粘膜下層小動脈內可見血栓形成，也可見嗜酸粒細細胞浸潤；部分潰瘍深及肌層，可見平滑肌細胞排列紊亂或出現(xiàn)斷裂。自愈組大鼠胃黏膜缺損較大，腺細胞排列紊亂，有炎性細胞浸潤，見瘢痕纖維生成，偶見血栓。維胃方高、中劑量組大鼠胃粘膜僅見上皮細胞腫脹，腺體間隙擴大，其他部分及粘膜下

11、層微循環(huán)無明顯病理改變。低劑量組部分潰瘍破壞粘膜下層，但病理變化均較輕。雷尼替丁組情況類似維胃方高、中劑量組，粘膜完整，腺體結構良好，未見明顯潰瘍病變。 （四）胃黏膜氨基己糖含量變化與模型組比較，維胃方可顯著增加胃粘膜氨基己糖含量（P<0.05），中劑量組最明顯（P<0.01）；高、低劑量組與雷尼替丁組無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；維胃方各劑量組與自愈組比較差異顯著（P<0.05），且與中劑量組差異最顯著（P<0.01）。

12、 結論: 1.冰乙酸直接作用胃漿膜表面，潰瘍形成造模成功率高，其愈合速度與人類潰瘍極為相似，病理組織切片顯示，符合慢性胃潰瘍的病理過程，此動物模型適合于藥物療效研究。 2.胃液PH值的數(shù)據(jù)統(tǒng)計結果中可以看出：模型組胃液PH值高于正常組，表明手術造模對動物本身就是一種應激，為防止乙酸的損害作用，大鼠機體應激性的調動體內的平衡機制，迅速中和酸性，以保護其受損傷的胃黏膜，這可能是模型組胃液pH值升高的原因。 3.從胃

13、黏模大體標本觀察發(fā)現(xiàn)，在用藥各組潰瘍面愈合情況良好，其中維胃方中劑量組效果最好，其次為維胃方高劑量組及雷尼替丁組，與自愈組有明顯區(qū)別。 4.光學顯微高倍鏡下觀察胃黏膜病理組織切片，維胃方中劑量組效果最佳，部分機制是通過改善微循環(huán)、抗炎和細胞再生這些方面發(fā)揮作用。 5.維胃方各治療組胃黏膜組織勻漿中氨基己糖含量明顯高于模型組，也高于雷尼替丁組，表明維胃方可以促進氨基己糖含量升高，起到保護胃黏膜的作用，其機理可能與保持胃粘膜

14、的疏水性及胃粘膜完整性相關，療效優(yōu)于西藥對照組。 綜上所述，本實驗采用綜合造模方法成功復制慢性胃潰瘍大鼠模型，模型組組織形態(tài)學觀察符合胃潰瘍的病理學標準，維胃方各組均顯示對潰瘍組織的良好修復作用，另外胃黏膜組織勻漿中HS含量明顯高于模型組，表明維胃方可以促進HS含量升高，起到保護胃黏膜的作用。以中劑量組療效更為顯著，與西藥對照組相比，胃黏膜HS含量明顯升高，說明療效優(yōu)于西藥對照組（雷尼替丁組）。實驗證明維胃方可以通過增強胃黏膜防