維胃方對大鼠胃潰瘍愈合作用及細(xì)胞生長因子EGF含量影響的研究.pdf

1、消化系統(tǒng)是人體最大的免疫器官系統(tǒng)，包含人體最多的免疫器官和組織，如肝、脾和胃腸的集合淋巴組織，因此在機(jī)體防御和清除外來抗原中起著重要作用。大量臨床資料已證實(shí)，消化系統(tǒng)自身免疫性疾病的發(fā)生率高，所涉及的器官較多，免疫學(xué)發(fā)病機(jī)制和臨床特征較復(fù)雜。近年來，消化系統(tǒng)免疫的理論和臨床研究進(jìn)展十分迅速，而作為消化系統(tǒng)免疫結(jié)構(gòu)的主要組成部分--黏膜免疫系統(tǒng)，由于結(jié)構(gòu)和功能的特異性，其相關(guān)性研究已逐漸發(fā)展成為一門獨(dú)立的學(xué)科。胃腸道免疫系統(tǒng)在機(jī)體抵抗和清

2、除外來抗原以及維持自身穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮極其重要的作用。若免疫系統(tǒng)功能紊亂，即可能導(dǎo)致某些免疫相關(guān)性疾病的發(fā)生。而在胃腸道免疫系統(tǒng)中，主要細(xì)胞生長因子--表皮生長因子(EGF)，對胃腸道黏膜免疫系統(tǒng)的維護(hù)和穩(wěn)定起著重要的作用。胃腸道疾病研究以免疫細(xì)胞因子為突破口，是現(xiàn)實(shí)可行而有重要意義的，近年來也有大量的課題圍繞著細(xì)胞生長因子類指標(biāo)進(jìn)行研究，這些研究也為消化系統(tǒng)疾病的免疫診斷和治療展現(xiàn)了廣闊的應(yīng)用前景。 胃潰瘍病(GU)即消化性潰瘍病(

3、PU)，是一種多病因疾病。各種與發(fā)病有關(guān)的因素如胃酸、胃蛋白酶、感染、遺傳、體質(zhì)、環(huán)境、飲食、生活習(xí)慣、神經(jīng)精神因素等，通過不同途徑或機(jī)制，使胃液中胃酸和胃蛋白酶的侵襲作用增強(qiáng)和(或)防御機(jī)制減弱，從而促成潰瘍發(fā)生。GU在全球發(fā)病率占人口10％左右。該病屬于祖國醫(yī)學(xué)的胃脘痛范疇。中醫(yī)對該病有著悠久的理論研究歷史，積累了大量的臨床診治經(jīng)驗(yàn)。尤其是金元時(shí)期形成雛形的脾胃學(xué)說，以李東垣的《脾胃論》為標(biāo)志。本課題以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，以細(xì)胞生長因子

4、EGF為切入點(diǎn)，參照Watanebet等的經(jīng)典造模方法，并加以改進(jìn)，建立了乙酸誘導(dǎo)大鼠胃潰瘍病模型。該模型是一種慢性潰瘍模型，持續(xù)時(shí)間短則8-10天，長則半年，一般60天左右可自然愈合，肉眼觀察和組織形態(tài)學(xué)觀察均與人類的消化性潰瘍非常相似，其自然復(fù)發(fā)率約為30％。本課題通過檢測大鼠胃液PH值變化、觀察胃體標(biāo)本，并進(jìn)一步通過對造模處病理切片進(jìn)行鏡下病理觀察；通過放射性免疫分析(RIA)方法檢測血清EGF含量，從而觀察探討維胃方對大鼠實(shí)驗(yàn)性

5、潰瘍的治療機(jī)制。 實(shí)驗(yàn)方法： 1.SPF級Wistar雄性大鼠，180～220g/只，隨機(jī)分為9組，每組8只：①正常組；②模型組；③自愈組；④維胃方高劑量組；⑤維胃方中劑量組；⑥維胃方低劑量組；⑦雷尼替丁組；⑧白及、三七中劑量組；⑨白及、三七高劑量組。正常組予每日正常飲食。模型組在造模三天后處死。自愈組觀察胃潰瘍自愈情況，在造模3天后正常飲食，與用藥組同時(shí)處死。其余各用藥組均在造模三天后予以相應(yīng)藥物每日每只2ml灌胃，灌

6、胃七天后處死。除正常組外，余各組大鼠造模前禁食不禁水二十四小時(shí)后，予10％水合氯醛腹腔注射麻醉，于劍突下縱向逐層切開腹壁約2cm長，暴露胃體，并在胃前壁竇體交界處靠胃竇側(cè)漿膜面，用100％乙酸浸泡過的直徑5mm的濾紙片壓貼60秒，然后將胃納入體內(nèi)，置于原位，逐層縫合，75％酒精消毒傷口。采集標(biāo)本前大鼠禁食不禁水二十四小時(shí)，具體步驟如下：①稱重，10％水合氯醛腹部麻醉后備毛，固定；②剝離胃，結(jié)扎幽門，于十二指腸及食管靠賁門兩處剪斷取胃，由

7、賁門擠胃液于PH試紙上測值并記錄；③10％甲醛溶液10ml由賁門注入胃腔，結(jié)扎賁門，放入10％甲醛溶液固定30分鐘；④沿胃大彎剪開胃，展平，沖洗胃內(nèi)壁，于造模處尋找潰瘍面，以潰瘍瘢痕平行于胃長軸方向的最長徑為中心選材，剪取全層胃組織置入10％甲醛溶液內(nèi)固定，進(jìn)一步石蠟包埋，制作病理切片。 2.實(shí)驗(yàn)對象的選取、分組及造模、給藥同前。采集標(biāo)本前大鼠禁食不禁水二十四小時(shí)。動(dòng)物處死后每只腹主動(dòng)脈采血4ml于真空管內(nèi)，傾斜放置30分鐘后，

8、放入低速離心機(jī)，以3000轉(zhuǎn)/分鐘，離心30分鐘，取上清2ml，置于EP管內(nèi)，-20℃冷藏，進(jìn)一步進(jìn)行放射性免疫測定(RIA)分析。 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理： 本實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以x±s表示，使用SPSS11.5軟件進(jìn)行單因素方差分析方法(One-wayANOVA)進(jìn)行多樣本均數(shù)比較。當(dāng)方差齊性時(shí)，使用Least-significantdifference(LSD)方法檢驗(yàn)，P<0.05為差異顯著性標(biāo)準(zhǔn)。 主要結(jié)果： 1.從

9、大體標(biāo)本觀察來看，各用藥組潰瘍面愈合情況與自愈組及模型組有明顯區(qū)別，尤其是雷尼替丁組及維胃方中、高劑量組，無穿孔、較少有潰瘍面炎性滲出現(xiàn)象，甚至很難辨別出潰瘍面，漿膜粘連不嚴(yán)重，愈合效果均優(yōu)于其他組別。從鏡下病理觀察情況來看，維胃方中劑量組較接近正常組，腺體形態(tài)基本修復(fù)，炎性細(xì)胞較少，黏膜下微循環(huán)未見明顯病理狀態(tài)，恢復(fù)情況較好；而模型組破壞較嚴(yán)重，缺損偶及肌層，造模處腺體完全破壞，非造模處炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重、腺體中度不典型性增生，黏膜下微

10、循環(huán)可見有血栓閉鎖性動(dòng)脈內(nèi)膜炎樣病理改變。從PH值的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果來看，F(xiàn)值為4.202，P值為0.000，各組之間的差異具有顯著性意義。其中模型組最高(3.288±0.300)，與維胃方三組及雷尼替丁組組間的差異均有顯著性意義(P<0.05)，與正常組比較(P<0.01)。 2.模型組大鼠的EGF水平較正常組明顯升高(差異具有顯著性意義，P<0.01)。各用藥組血清EGF含量均較模型組下降(各用藥組與模型組差異均具顯著性意義，P

11、<0.05，白及、三七高劑量組除外)，其中雷尼替丁組和維胃方中、高劑量組下降程度更為明顯(P<0.01)，以維胃方中劑量組最低(0.253±0.055ng/ml)。自愈組EGF水平較模型組雖然有所下降，但是差異不顯著，而除白及、三七高劑量組外，各用藥組與自愈組的差異比較均具顯著性意義(P<0.05)。 結(jié)論： 1.通過乙酸直接作用于大鼠胃漿膜表面，形成實(shí)驗(yàn)性強(qiáng)刺激的造模方法模型典型，成功率較高，操作性、可行性較強(qiáng)。

12、 2.根據(jù)大體標(biāo)本觀察情況，用藥組別潰瘍面愈合的情況與自愈組有明顯區(qū)別，尤其是雷尼替丁組及維胃方中、高劑量組，愈合效果均優(yōu)于其他組別。 3.從鏡下病理觀察情況來看，維胃方中劑量組更接近正常組，腺體形態(tài)基本修復(fù)，炎性細(xì)胞較少，黏膜下循環(huán)未見明顯病理狀態(tài)，恢復(fù)情況較好；而模型組破壞較嚴(yán)重，缺損偶及肌層，造模處腺體完全破壞，非造模處炎性細(xì)胞浸潤嚴(yán)重、腺體變形，黏膜下循環(huán)病理改變明顯。 4.從胃液PH值的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)結(jié)果中可以看出

13、潰瘍程度越嚴(yán)重，胃泌酸功能越差，胃內(nèi)PH值越高(模型組與正常組比較P<0.01)。而維胃方三組的PH值均接近正常組(三組與模型組比較均P<0.05)，與雷尼替丁組的PH值亦很接近。說明經(jīng)維胃方治療確實(shí)能有效的修復(fù)損害的胃組織，恢復(fù)胃的正常泌酸功能，其效果與臨床常用胃潰瘍治療藥物雷尼替丁相似。這也符合大體標(biāo)本的觀察結(jié)果。 5.對大鼠血清EGF水平的測定結(jié)果反映出：經(jīng)維胃方治療，對胃潰瘍愈合效果是明顯的。數(shù)據(jù)中雷尼替丁組，維胃方中、

14、高劑量組更接近正常組(0.239±0.432ng/ml)水平(三組與模型組比較均P<0.01，與自愈組比較P<0.05)，其中維胃方中劑量組(0.253±0.055ng/ml)最接近。維胃方的治療效果與GU治療常用藥雷尼替丁相似，差別不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(而且維胃方中劑量組更低)。而白及、三七配伍用藥的組別雖然對造模后血清EGF含量有影響，但均不及維胃方三組和雷尼替丁組，其中高劑量組與自愈組差異無顯著性，這說明維胃方中各藥聯(lián)合配伍要比其拆方

15、白及、三七配伍用藥的療效明顯。 6.維胃方的拆方--白及、三七配伍用藥的治療效果無論從大體觀察、病理鏡下觀察、PH值測定(拆方兩組的均值都高于維胃方三組和雷尼替丁組，其中白及、三七高劑量組與維胃方低劑量組比較差異顯著，P<0.05)，還是血清EGF水平測定結(jié)果(拆方兩組的均值分別為0.3050、0.3288，都高于均值皆小于0.2800的維胃方中、高劑量組和雷尼替丁組)來看，均不及維胃方原方和雷尼替丁組別的效果明顯。 綜