核心巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶對早期B細(xì)胞分化發(fā)育的調(diào)節(jié)作用機(jī)理.pdf

1、糖基化修飾是真核細(xì)胞蛋白質(zhì)翻譯后的一種重要加工過程，對蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能產(chǎn)生影響，約有50％的蛋白質(zhì)被糖基修飾。蛋白質(zhì)的糖基化需要糖基轉(zhuǎn)移酶將糖分子轉(zhuǎn)移至蛋白質(zhì)上。FUT8(全稱為α(1，6)fucosyltransferase)是一種重要的糖基轉(zhuǎn)移酶，在高爾基體內(nèi)，催化與GDP相連的巖藻糖轉(zhuǎn)移至N-糖鏈核心結(jié)構(gòu)，以α-1,6糖苷鍵形式相連，形成核心巖藻糖。核心巖藻糖的修飾參與影響細(xì)胞生長、細(xì)胞黏附、信號傳導(dǎo)等。
　　免疫系統(tǒng)是生

2、物體的疾病防御系統(tǒng)，參與固有性和適應(yīng)性免疫應(yīng)答的大多數(shù)關(guān)鍵蛋白質(zhì)都是糖蛋白。體液免疫是指由B細(xì)胞活化后產(chǎn)生的特異性抗體發(fā)揮免疫效應(yīng)。先前的研究發(fā)現(xiàn)，前B細(xì)胞的抗原受體(pre-BCR)的N46糖基化對于pre-BCR的形成和前B細(xì)胞的發(fā)育分化是必不可少的。此外，由體液免疫產(chǎn)生的IgG1抗體的核心巖藻糖基化修飾去除后，抗體與受體FcγRⅢ親和力增加，抗體依賴的細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒性作用(ADCC)增強(qiáng)50-100倍。
　　為了探究FUT

3、8是否影響體液免疫，我們對FUT8野生型(FUT8+/+)和敲除型(FUT8-/-)的小鼠骨髓細(xì)胞進(jìn)行流式分析，發(fā)現(xiàn)FUT8-/-小鼠的祖B細(xì)胞數(shù)量與野生型小鼠相似，但前B細(xì)胞及成熟B細(xì)胞的數(shù)量顯著下降，說明FUT8可能參與B細(xì)胞的分化發(fā)育。為進(jìn)一步了解其分子機(jī)制，我們用復(fù)制缺陷型重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體包裝病毒顆粒，感染前B細(xì)胞株(70Z/3)，構(gòu)建了FUT8沉默(70Z/3-KD)和恢復(fù)(70Z/3-KD-re)的前B細(xì)胞模型。我們發(fā)現(xiàn)，

4、核心巖藻糖基化的缺失，導(dǎo)致構(gòu)成pre-BCR的μHC與λ5的相互作用受阻，70Z/3-KD細(xì)胞膜上的pre-BCR表達(dá)水平顯著下降;此外，pre-BCR介導(dǎo)的細(xì)胞信號傳導(dǎo)（如Igα的磷酸化）能力及前B細(xì)胞的克隆形成能力下降。70Z/3-KD-re細(xì)胞恢復(fù)模型能使上述變化恢復(fù)。另外，與野生型小鼠相比，F(xiàn)UT8-/-小鼠的未成熟B細(xì)胞群的與早期B細(xì)胞分化發(fā)育相關(guān)基因的表達(dá)下降，小鼠血清中免疫球蛋白量普遍減少。我們進(jìn)而使用CRISPR-Cas