黃芪、水蛭對(duì)大鼠系膜細(xì)胞NF-κB、MMP-2、Fas-FasL表達(dá)的相關(guān)性研究.pdf

1、系膜增生性腎小球腎炎(MsPGN)是我國(guó)一種病理類(lèi)型較為常見(jiàn)的腎臟疾病，系膜細(xì)胞增殖是一種常見(jiàn)的各種腎小球疾病的共同病理變化，研究證實(shí)腎小球硬化的發(fā)生最主要的原因就是系膜細(xì)胞增殖分泌的炎癥介質(zhì)及細(xì)胞外基質(zhì)沉積。西醫(yī)治療多局限應(yīng)用糖皮質(zhì)激素，免疫抑制劑等，副作用較大且易復(fù)發(fā)。近年來(lái)中醫(yī)藥在該疾病應(yīng)用療效凸顯，特別是以黃芪、水蛭為代表的益氣化瘀藥物為主，已有大量文獻(xiàn)報(bào)道其在抑制系膜細(xì)胞增殖方面的應(yīng)用。
　　國(guó)內(nèi)外學(xué)者研究表明，系膜細(xì)胞

2、的增殖與核轉(zhuǎn)錄因子(NF-κB)激活及細(xì)胞外基質(zhì)的降解受到抑制息息相關(guān);基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)系統(tǒng)是一個(gè)重要的調(diào)節(jié)ECM降解的酶系統(tǒng);Fas/FasL系統(tǒng)是近年來(lái)研究比較多的一種參與調(diào)控各種細(xì)胞凋亡的基因。本實(shí)驗(yàn)擬從NF-κB、MMP-2、Fas/Fasl等因子入手探討黃芪、水蛭含藥血清及有效成分抑制系膜細(xì)胞增殖的機(jī)理。
　　目的:研究黃芪、水蛭含藥血清及有效成分對(duì)脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖中NF-κB、MMP-2、F

3、as/Fasl的表達(dá)影響，探討黃芪、水蛭含藥血清及有效成分抑制系膜細(xì)胞增殖的可能機(jī)理。
　　方法:LPS誘導(dǎo)大鼠系膜細(xì)胞(HBEH)增殖，采用黃芪多糖、黃芪甲苷、毛蕊異黃酮、水蛭素及黃芪水蛭復(fù)方含藥血清進(jìn)行干預(yù)，24小時(shí)后收集細(xì)胞，采用CCK-8法觀察各單體及含藥血清對(duì)HBEH的增殖抑制率， Real time PCR法測(cè)定NF-κB、MMP-2、Fas/FaslmRNA的表達(dá)變化。
　　結(jié)果:1.Real time PCR

4、法顯示:LPS誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖后，模型組NF-κBmRNA表達(dá)與正常組比較顯著增加(P＜0.05)，而黃芪高血清組、水蛭高血清組、黃芪高水蛭高血清組、黃芪低水蛭高血清組與模型組比NF-κBmRNA表達(dá)水平均明顯降低(P＜0.01)。而黃芪高水蛭高血清組與黃芪低水蛭高血清組、水蛭高血清組相比P＜0.05。可以看出，各含藥血清組均可以不同程度的抑制NF-κBmRNA表達(dá)水平;各含藥血清組之間相比，黃芪高水蛭高血清組效果優(yōu)于黃芪低水蛭高血清組

5、和水蛭高血清組。
　　2.Real time PCR法顯示:LPS誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖后，模型組MMP-2mRNA表達(dá)與正常組比較顯著增加(P＜0.05)，而黃芪高血清組、水蛭高血清組、黃芪高水蛭高血清組、黃芪低水蛭高血清組與模型組比MMP-2mRNA表達(dá)水平均明顯降低(P＜0.01)。而黃芪高血清組、黃芪高水蛭高血清組、黃芪低水蛭高血清組各組與水蛭高血清組相比P＜0.05?？梢钥闯?，各含藥血清組均可以不同程度的抑制MMP-2mRNA

6、表達(dá)水平;各含藥血清組之間相比，黃芪高血清組、黃芪高水蛭高血清組、黃芪低水蛭高血清組的效果優(yōu)于水蛭高血清組。
　　3.Real time PCR法顯示:LPS誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖后，模型組FASmRNA表達(dá)與正常組比較顯著增加(P＜0.05)，而黃芪高血清組、水蛭高血清組、黃芪高水蛭高血清組、黃芪低水蛭高血清組與模型組比FASmRNA表達(dá)水平均明顯降低(P＜0.01)?？梢钥闯?，各含藥血清組均可以不同程度的抑制FASmRNA表達(dá)水平;

7、各含藥血清組之間比較沒(méi)有明顯差別，P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.Real time PCR法顯示:LPS誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖后，模型組FASL mRNA表達(dá)與正常組比較顯著增加(P＜0.05)，而黃芪高血清組、水蛭高血清組、黃芪高水蛭高血清組、黃芪低水蛭高血清組與模型組比FASL mRNA表達(dá)水平均明顯降低(P＜0.01)?？梢钥闯?，各含藥血清組均可以不同程度的抑制FASLmRNA表達(dá)水平;各含藥血清組之間比較沒(méi)有明顯差別，P＞

8、0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
　　5.Real time PCR法顯示:LPS誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖后，F(xiàn)AS mRNA表達(dá)明顯升高，為正常細(xì)胞的2.51倍(與正常組比較，p＜0.05)，各單體組FAS mRNA表達(dá)量與LPS組相比均有顯著的下降（與LPS組比較，p＜0.01）。可以看出，各單體組均可以不同程度的抑制FASmRNA表達(dá)水平;各單體組之間比較沒(méi)有明顯差別，P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
　　6.Real time PCR法顯示:L

9、PS誘導(dǎo)系膜細(xì)胞增殖后，F(xiàn)ASLmRNA表達(dá)明顯升高，為正常細(xì)胞的3.34倍(與正常組比較，p＜0.05)，各單體組FASLmRNA表達(dá)量與LPS組相比均有顯著的下降(與LPS組比較，p＜0.01)?？梢钥闯?，各單體組均可以不同程度的抑制FASLmRNA表達(dá)水平;各單體組之間比較沒(méi)有明顯差別，P＞0.05無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義
　　結(jié)論:1.各血清組均可降低LPS誘導(dǎo)HEBH增殖后NF-κBmRNA高表達(dá)，其中黃芪高水蛭高血清組效果優(yōu)于其余

10、各組。
　　2.各血清組均明顯降低LPS誘導(dǎo)HEBH增殖后MMP-2mRNA高表達(dá)，其中黃芪高血清組、黃芪高水蛭高血清組、黃芪低水蛭高血清組的效果優(yōu)于水蛭高血清組。
　　3.各血清組均可降低LPS誘導(dǎo)HEBH增殖后FasmRNA高表達(dá)，各血清組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　4.各血清組均可降低LPS誘導(dǎo)HEBH增殖后FaslmRNA高表達(dá)，各血清組兩兩比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　5.各單體組均可降低LPS誘導(dǎo)HEBH增