AEG-1-MTDH、NF-κB、MMP-9在胃癌中的表達(dá)及相關(guān)性的研究.pdf

1、本課題旨在進(jìn)一步探討胃癌中AEG-1/MTDH的表達(dá)及其臨床意義，并探尋胃癌組織中AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9表達(dá)的相互關(guān)系，以及研究胃癌細(xì)胞中AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9信號(hào)通路情況，探尋提高胃癌治療效果的新的特異性靶分子。本課題進(jìn)行了以下三部分研究:第一部分即胃癌組織中AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9表達(dá)情況及臨床意義，以及胃癌組織中AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9表達(dá)的相互關(guān)

2、系;第二部分即檢測(cè)AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9在胃癌組織及區(qū)域轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)情況及其臨床意義;第三部分即探討慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù)抑制AEG-1/MTDH表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC7901細(xì)胞增殖及遷移的影響，并探討胃癌細(xì)胞中AEG-1/MTDH、NF-κB、MMP-9信號(hào)通路情況。
　　第一部分:胃癌組織AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9的表達(dá)情況及其臨床意義
　　目的：
　　探討AEG-

3、1/MTDH、NF-κB及MMP-9在胃癌組織中的表達(dá)情況及其與胃癌臨床病理特征的關(guān)系，探尋胃癌組織中AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9表達(dá)相互關(guān)系。
　　方法：
　　采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)84例胃癌患者AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9表達(dá)情況，觀察三個(gè)指標(biāo)之間的相互關(guān)系及其與患者臨床病理特征及預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1.胃癌組織中AEG-1/MTDH陽(yáng)性表達(dá)的PU（positive

4、unit，PU）值明顯高于癌旁組織，其陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，分化程度越低、TNM分期越高，AEG-1/MTDH陽(yáng)性表達(dá)的PU值越高，但其陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、浸潤(rùn)深度、Lauren分型無(wú)關(guān);生存曲線顯示AEG-1/MTDH陰性表達(dá)患者生存期顯著長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)者。
　　2.胃癌組織中NF-κB陽(yáng)性表達(dá)的PU值明顯高于癌旁組織，其陽(yáng)性表達(dá)與分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期

5、、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，分化程度越低、浸潤(rùn)深度越深、TNM分期越高，NF-κB陽(yáng)性表達(dá)的PU值越高，但其陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、Lauren分型無(wú)關(guān);生存曲線顯示NF-κB陰性表達(dá)患者生存期顯著長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)者。
　　3.胃癌組織中MMP-9陽(yáng)性表達(dá)的PU值明顯高于癌旁組織，其陽(yáng)性表達(dá)與浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P＜0.05)，浸潤(rùn)深度越深、TNM分期越高，MMP-9陽(yáng)性表達(dá)的PU值越高

6、，但其陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的性別、年齡、腫瘤大小、腫瘤部位、分化程度、Lauren分型無(wú)關(guān);生存曲線顯示MMP-9陰性表達(dá)患者生存期顯著長(zhǎng)于陽(yáng)性表達(dá)者。
　　4.胃癌組織中AEG-1/MTDH、NF-κB陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)，NF-κB、MMP-9呈正相關(guān)，AEG-1/MTDH、MMP-9陽(yáng)性表達(dá)亦呈正相關(guān)。
　　5.COX回歸分析模型單因素分析顯示，分化程度、臨床TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及AEG-1/MTDH表達(dá)是顯著影響胃癌術(shù)后生存

7、率的指標(biāo)(P＜0.05)，無(wú)顯著影響的指標(biāo)有:年齡、性別、浸潤(rùn)程度、NF-κB表達(dá)及MMP-9表達(dá)(P＞0.05)。COX回歸分析模型多因素分析顯示，AEG-1/MTDH表達(dá)、淋巴結(jié)是否轉(zhuǎn)移及臨床TNM分期是影響胃癌術(shù)后生存率的指標(biāo)中最為重要的三個(gè)指標(biāo)。生存曲線顯示AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9三陰性表達(dá)患者生存期顯著長(zhǎng)于三陽(yáng)性表達(dá)者(P＜0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.胃癌組織中AEG-1/MTDH、NF-

8、κB及MMP-9陽(yáng)性表達(dá)的PU值均明顯高于癌旁組織，并且與胃癌的臨床病理特征相關(guān)。
　　2.AEG-1/MTDH可能通過(guò)調(diào)控NF-κB、MMP-9的表達(dá)來(lái)參與胃癌的發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移。
　　3.檢測(cè)胃癌組織中AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9的表達(dá)，有助于胃癌發(fā)生、發(fā)展及浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移的判斷并有利于胃癌預(yù)后的評(píng)價(jià)，可能作為評(píng)估胃癌病情進(jìn)展的輔助指標(biāo)之一，并可能作為胃癌分子治療的新靶點(diǎn)。
　　第二部分:AEG-

9、1/MTDH、NF-κB及MMP-9在胃癌組織及區(qū)域轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)及臨床意義
　　目的：
　　探討AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9在胃癌及區(qū)域轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中的表達(dá)情況及其臨床意義。
　　方法：
　　采用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)64例胃癌及第一站淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者AEG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9表達(dá)情況，觀察在胃癌及區(qū)域轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)中三個(gè)指標(biāo)之間的相互關(guān)系及其與臨床病理特征的關(guān)系。
　　結(jié)果：<

10、br>　　1.AEG-1/MTDH在第一站淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于胃癌原發(fā)灶中的陽(yáng)性表達(dá)率(P＜0.05)，胃癌原發(fā)灶中AEG-1/MTDH的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中AEG-1/MTDH的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.432，P=0.000)。胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶A(yù)EG-1/MTDH陽(yáng)性表達(dá)與分化程度有關(guān)(P＜0.05)，但其陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的性別、年齡、腫瘤大小及部位、浸潤(rùn)深度、Lauren分型及TNM分期無(wú)關(guān)。
　　2.NF-κB在第

11、一站淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于胃癌原發(fā)灶中的陽(yáng)性表達(dá)率(P＜0.05)，胃癌原發(fā)灶中NF-κB的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中NF-κB的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.372，P=0.002)。胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶NF-κB陽(yáng)性表達(dá)與TNM分期有關(guān)(P＜0.05)，但其陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的性別、年齡、腫瘤大小及部位、分化程度、浸潤(rùn)深度及Lauren分型無(wú)關(guān)。
　　3.MMP-9在第一站淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于胃癌原發(fā)灶中的陽(yáng)性表達(dá)率(P＜

12、0.05)，胃癌原發(fā)灶中MMP-9的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中MMP-9的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.422，P=0.001)。胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶MMP-9陽(yáng)性表達(dá)與胃癌的性別、年齡、腫瘤大小及部位、分化程度、浸潤(rùn)深度、Lauren分型及TNM分期均無(wú)關(guān)。
　　4.胃癌原發(fā)灶及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶中AEG-1/MTDH、NF-κB陽(yáng)性表達(dá)呈正相關(guān)，NF-κB、MMP-9呈正相關(guān)，AEG-1/MTDH、MMP-9陽(yáng)性表達(dá)亦呈正相關(guān)性。
　　5.生存

13、曲線顯示胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶A(yù)EG-1/MTDH陰性表達(dá)患者生存期明顯長(zhǎng)于其陽(yáng)性表達(dá)者(P=0.035)。然而生存曲線顯示胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶NF-κB及MMP-9陰性表達(dá)患者生存期雖然稍長(zhǎng)于NF-κB及MMP-9陽(yáng)性表達(dá)者，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。生存曲線顯示胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶A(yù)EG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9三陰性表達(dá)患者生存期雖然稍長(zhǎng)于三陽(yáng)性表達(dá)者，但差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論：
　　1.AEG-1/MTDH、NF-κB

14、及MMP-9在胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶的表達(dá)均較原發(fā)灶明顯增高，并且已經(jīng)發(fā)生異質(zhì)性改變，并且與胃癌的臨床病理特征相關(guān)。
　　2.AEG-1/MTDH可能通過(guò)調(diào)控NF-κB、MMP-9的表達(dá)來(lái)參與胃癌的浸潤(rùn)及轉(zhuǎn)移。
　　3.檢測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶A(yù)EG-1/MTDH、NF-κB及MMP-9的表達(dá)情況，對(duì)研究胃癌轉(zhuǎn)移過(guò)程有應(yīng)用價(jià)值。檢測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移灶A(yù)EG-1/MTDH表達(dá)情況，有助于判斷胃癌的預(yù)后。
　　第三部分:慢病毒介導(dǎo)的R

15、NAi技術(shù)抑制AEG-1/MTDH表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC7901生物學(xué)特性的影響及AEG-1/MTDH、NF-κB、MMP-9信號(hào)通路的研究
　　目的：
　　探討慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù)抑制AEG-1/MTDH表達(dá)對(duì)胃癌細(xì)胞株SGC7901細(xì)胞增殖及遷移的影響，并探討胃癌細(xì)胞中AEG-1/MTDH、NF-κB、MMP-9信號(hào)通路情況。
　　方法：
　　采用慢病毒介導(dǎo)的RNAi技術(shù)抑制AEG-1/MTDH的表達(dá)，采

16、用PT-PCR法檢測(cè)AEG-1/MTDH抑制效果，通過(guò)MTT法和遷移實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)慢病毒介導(dǎo)的shRNA抑制AEG-1/MTDH表達(dá)后細(xì)胞增殖及遷移的變化，采用Western-blot分析胃癌細(xì)胞中AEG-1/MTDH、NF-κB、MMP-9信號(hào)通路情況。
　　結(jié)果：
　　1.shRNA干擾72h后，shRNA干擾組胃癌SGC7901細(xì)胞株中AEG-1/MTDHmRNA表達(dá)明顯低于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜

17、0.001)。
　　2.shRNA干擾72h后，采用MTT法分析胃癌SGC7901細(xì)胞株增殖變化，shRNA干擾組細(xì)胞增殖率較空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組有顯著性下降(P＜0.05)。
　　3.shRNA干擾24h后，通過(guò)細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)來(lái)評(píng)估細(xì)胞遷移能力的改變，結(jié)果顯示shRNA干擾組胃癌細(xì)胞遷移能力較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組明顯減少。
　　結(jié)論：
　　1.shRNA干擾后，胃癌細(xì)胞株SGC7901中AEG-1/MTDH