青霉菌P6產(chǎn)木素過(guò)氧化物酶的發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、木素降解是地球上碳素循環(huán)的限速過(guò)程，是植物纖維素材料有效利用的關(guān)鍵步驟。催化木素降解的酶有木素過(guò)氧化物酶(Ligninperoxidase，簡(jiǎn)稱LiP)、錳過(guò)氧化物酶(Manganeseperoxidase，簡(jiǎn)稱MnP)和漆酶(Laccase)。其中LiP是木素降解的關(guān)鍵酶，并能降解一些多環(huán)芳烴類化合物。青霉菌P6是本實(shí)驗(yàn)室選育得到的一株具有高降解褐煤活性的菌株，研究發(fā)現(xiàn)其能分泌胞外LiP，及少量MnP。本論文進(jìn)一步研究P6產(chǎn)生LiP和

2、MnP的情況，并優(yōu)化其產(chǎn)LiP的最佳發(fā)酵參數(shù)。　　首先研究了P6在天然培養(yǎng)基-稻米糠、玉米糠、麥糠和合成培養(yǎng)基GMY中產(chǎn)酶情況，結(jié)果表明MnP的酶活較低，LiP的活力較高，且麥糠是產(chǎn)LiP較理想的底物。隨后通過(guò)單因素方法研究了添加苯甲醇和MnSO4對(duì)酶活的影響，結(jié)果表明MnSO4對(duì)酶活有較大的提高；研究了初始pH、裝液量和溫度對(duì)酶活的影響，結(jié)果表明pH4.8、裝液量100mL/500mL和溫度28℃的條件有利于酶活的提高。進(jìn)一步用正交

3、試驗(yàn)方法對(duì)MnSO4添加量、麥糠含量和培養(yǎng)基pH進(jìn)行了詳細(xì)研究，結(jié)果表明麥糠含量和pH對(duì)酶活有顯著的影響，MnSO4影響不顯著，在試驗(yàn)范圍內(nèi)最高酶活達(dá)到了2.69U/mL。在此基礎(chǔ)上通過(guò)單及雙因素回歸試驗(yàn)確定了麥糠和MnSO4的最佳用量分別為5％和5.66mM。最終得到了在孢子接種量1.1×106孢子/mL下P6產(chǎn)LiP的最佳發(fā)酵條件為，培養(yǎng)時(shí)間8d，初始pH4.8，裝液量100mL/500mL；最佳培養(yǎng)基組成為麥糠5％，MnSO45.