卷心菜中過氧化物酶熱穩(wěn)定性的初步研究

1、實驗一實驗一卷心菜中過氧化物酶熱穩(wěn)定性的初步研究卷心菜中過氧化物酶熱穩(wěn)定性的初步研究一、一、實驗原理實驗原理果蔬中的過氧化物酶（peroxidase）往往具有較高的熱穩(wěn)定性，對果蔬進行熱燙處理時，常以過氧化物酶是否失活作為熱燙是否充分的標準。許多研究表明果蔬中的過氧化物酶有熱穩(wěn)定和熱不穩(wěn)定兩部分。這兩部分的比例取決于果蔬的品種和熱燙處理的溫度。過氧化物酶催化的典型反應為：H2O2＋AH2→A＋2H2O。AH2是無色的還原性化合物，如果它

2、經過氧化轉變成有色的A，那么反應體系在特定波長下的吸光值就會隨反應進行而增加。因此，可以用分光光度法測定過氧化物酶的活力。二、試劑和儀器試劑：0.05molL磷酸鹽緩沖液pH7.0，含1.0molLNaCl(緩沖液Ⅰ)、0.1molL磷酸鹽緩沖液pH7.0(緩沖液Ⅱ)、1%鄰苯二胺乙醇溶液、0.3%過氧化氫溶液儀器：組織搗碎機、抽濾裝置、水浴鍋、721分光光度計（含比色皿）、秒表、常規(guī)玻璃儀器三、實驗步驟1、從卷心菜中提取過氧化物酶12

3、5g卷心菜＋125mL緩沖液Ⅰ↓均質（20000rpm，2min）勻漿↓抽濾液體↓離心（8000rpm，15min，4℃）↓↓殘渣濾過液（粗酶液）2、過氧化物酶熱處理將從卷心菜中萃取得到的過氧化物酶粗酶液置于試管中。取適量酶液稀釋5倍左右，過濾后測定酶活。熱處理時間不同的幾組樣品在不同稀釋倍數(shù)及加酶量條件下分別測定了消光值，如下表：熱處理消光值時間s10203040506070809010011012085℃0.5min0.0450.0

4、880.1380.1880.2400.2930.3480.4050.4640.5230.5850.64985℃1.0min0.0470.0910.1360.1810.2290.2780.3270.3790.4320.4860.5410.59985℃1.5min0.0150.0320.0540.0750.0970.1190.1410.1650.1880.2110.2340.25985℃2.0min0.0420.0780.1170.1550

5、.1930.2340.2750.3170.3610.4060.4520.49985℃3.0min0.0060.0120.0180.0250.0310.0380.0440.0520.0590.0660.0740.08285℃5.0min0.0040.0040.0050.0060.0080.0090.0110.0130.0150.0170.0190.02185℃7.0min0.0040.0030.0040.0040.0040.0030.00