蜂毒素與基因變構(gòu)IL-2嵌合蛋白的純化工藝探索和生物學(xué)活性研究.pdf

1、目的：將含重組質(zhì)粒pGEX-4T-2/melittin-<'88>ArgIL-2的大腸桿菌進(jìn)行表達(dá)發(fā)酵條件的優(yōu)化，得到可溶性表達(dá)的重組蛋白；分離純化該重組蛋白，得到高純度的、足量的、具有生物學(xué)活性的蜂毒素與基因變構(gòu)IL-2(melittin-<'88>ArgIL-2)嵌合蛋白，探索建立該蛋白的純化工藝；研究此嵌合蛋白在體外增強(qiáng)免疫功能和抗腫瘤的生物學(xué)活性。 方法：將含重組質(zhì)粒的大腸桿菌DH5a，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)進(jìn)行高效表達(dá)，經(jīng)反

2、復(fù)實(shí)驗(yàn)摸索表達(dá)出可溶性蛋白；經(jīng)過親和層析、凝血酶Thrombin酶切和離子交換層析進(jìn)行純化，純化的重組melittin-<'88>ArgIL-2嵌合蛋白，經(jīng)SDS-PAGE電泳鑒定蛋白純度并進(jìn)行定量；用液相測定法研究嵌合蛋白的抑菌活性，用MTT法研究嵌合蛋白對外周血單個核細(xì)胞PBMC增殖、NK細(xì)胞殺傷活性、人卵巢癌細(xì)胞SKOV<,3>和Hela細(xì)胞生長抑制的作用。 結(jié)果：在25℃和IPTG0.8mmol/L條件下，表達(dá)出了可溶

3、性蛋白；經(jīng)過一系列的分離純化步驟，純化后的重組melittin-<'88>ArgIL-2嵌合蛋白純度達(dá)95％，蛋白濃度大約200mg/L，建立了該嵌合蛋白的純化工藝；純化后的嵌合蛋白在體外能抑制金黃色葡萄球菌和大腸桿菌的生長，能促進(jìn)PBMC細(xì)胞增殖，能增強(qiáng)NK細(xì)胞的殺傷活性，能抑制人卵巢癌細(xì)胞SKOV3和Hela細(xì)胞的生長增殖。 結(jié)論：建立了melittin-<'88>ArgIL-2嵌合蛋白的純化工藝，該嵌合蛋白在體外具有一定