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1、[目的]該實驗為重點研究反式高爾基體在毒素細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運過程中的作用,我們設計了一個反式高爾基體的靶向信號肽基因YQRL(Tyr-Gln-Arg-Leu)連接在RTA分子的羧基端,用原核表達蛋白體系,純化并測定RTA-YQRL與RTA蛋白對Hela(人宮頸癌細胞),WISH(人羊膜上皮細胞),SKOV-3(人卵巢癌細胞)三種細胞的毒性作用.[結(jié)論]該實驗用基因工程方法原核表達了RTA蛋白和RTA-YQRL蛋白,利用RTA蛋白和F3GA的結(jié)合
2、特性,溫和、簡單、有效地洗脫了目的蛋白.雖然原核表達的蛋白沒有糖鏈,但是體外細胞毒性實驗證明兩者仍具有較高的毒性.RTA-YQRL蛋白的細胞毒性約為RTA蛋白的2~40倍,提示高爾基體可能是毒素在細胞內(nèi)轉(zhuǎn)運過程中的重要一環(huán).[目的]國外已有研究報道抗體分泌和毒素內(nèi)吞途徑可以互相影響;RTA與產(chǎn)生抗RTA單克隆抗體的雜交瘤細胞一起孵育時,可與分泌途徑中的抗體結(jié)合從而中和RTA的細胞毒性作用.為研究抗RTA的單克隆抗體分泌和RTA內(nèi)吞兩條途
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