比較FK506和FK1706免疫抑制和促進(jìn)神經(jīng)軸突再生作用的體外研究.pdf

1、目的：
　　目前已知FK506具有促進(jìn)神經(jīng)再生作用，但其強(qiáng)效的免疫抑制作用限制了臨床應(yīng)用，按照去除其免疫抑制結(jié)構(gòu)設(shè)計(jì)的衍生物FK1706的免疫抑制作用和促進(jìn)神經(jīng)再生作用如何，均尚未明了。本研究通過比較不同濃度FK506和FK1706對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheral blood mononuclear cell,PBMC)的免疫抑制及對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞(Neuroblastoma cell,SH-SY5Y)的神經(jīng)軸突再生作

2、用，以明確FK1706的免疫抑制和促進(jìn)神經(jīng)再生作用。探討FK1706用于周圍神經(jīng)損傷治療的可能性。
　　方法：
　　實(shí)驗(yàn)分為兩部分：
　　第一部分：取健康志愿者的外周血，應(yīng)用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度離心法分離PBMC。用不同濃度的FK506和FK1706干預(yù)PBMC，分設(shè)9組：空白對(duì)照組，4組不同濃度FK506(0.1nM,1nM,10nM,100nM)，4組不同濃度FK1706(0.1nM,1nM,10nM,100n

3、M)，比較各組PBMC的體外增殖的抑制率和上清液中的白細(xì)胞介素-2(Interleuk in-2,IL-2)的含量。
　　第二部分：培養(yǎng)SH-SY5Y，用不同濃度的FK506和FK1706干預(yù)SH-SY5Y，分設(shè)9組：空白對(duì)照組，4組不同濃度FK506(0.1nM,1nM,10nM,100nM)，4組不同濃度FK1706(0.1nM,1nM,10nM,100nM)；用倒置顯微鏡觀察比較各組的突觸長(zhǎng)度的變化。
　　統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：

4、各實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用x±s表示，應(yīng)用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，各組間比較采用單因素方差分析(One-way ANOVA)。p<0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：
　　第一部分：
　　1.FK50610nM和100nM組干預(yù)的PBMC細(xì)胞全部失活，0.1nM和1nM FK506對(duì)PBMC體外增殖和IL-2的分泌均表現(xiàn)出顯著的抑制作用，呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性(p<0.05)。
　　2.實(shí)驗(yàn)組不同濃度FK

5、1706對(duì)PBMC體外增殖和IL-2的分泌均表現(xiàn)出一定程度的抑制作用，與空白對(duì)照組相比，0.1nM無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，余濃度組呈濃度依賴性和時(shí)間依賴性(p<0.05)，但較同濃度FK506實(shí)驗(yàn)組相比，F(xiàn)K1706對(duì)PBMC體外增殖和IL-2的分泌抑制作用明顯減弱(p<0.05)。
　　第二部分：
　　在10nM濃度組，F(xiàn)K506和FK1706均具有最佳的促SH-SY5Y細(xì)胞突起生長(zhǎng)作用(p<0.01)。與空白對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組不同