鈉鈣交換蛋白與遠處后適應(yīng)心肌保護作用相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　冠心病作為對人類最具威脅的疾病之一，盡快使閉塞的冠脈血供恢復(fù)仍是當前主要治療措施，盡管多數(shù)情況下能夠使患者病情好轉(zhuǎn)康復(fù)，但有時伴隨著血管再通，心肌恢復(fù)供血后反而出現(xiàn)心率失常及器質(zhì)性損傷等，對機體造成第二次打擊，引起再灌注損傷。鈣離子（Ca2+）在再灌注損傷中發(fā)揮重要作用，找到一種能夠有效減輕缺血-再灌注損傷的方法已經(jīng)是當今相關(guān)領(lǐng)域主要研究方向。遠處后適應(yīng)（RIP）具有可操作性強、對靶器官損傷小的優(yōu)點，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)后便迅

2、速受到研究人員的關(guān)注，但其確切機制十分復(fù)雜，目前尚不特別清楚，有研究表明其主要機制是激活細胞內(nèi)PI3k-AKt-eNOS通路進而激活下游靶分子，這些靶分子具有保護心肌細胞功能的作用。另有研究表明，鈉鈣交換蛋白（NCX）在再灌注過程中承擔著將鈣離子轉(zhuǎn)運入細胞內(nèi)的角色，遠處后適應(yīng)過程中亦存在NCX逆向轉(zhuǎn)運的抑制。在遠處后適應(yīng)期間，PI3k-AKt-eNOS通路與鈉鈣交換蛋白的抑制是否存在聯(lián)系，尚無相關(guān)報道。
　　目的：
　　探討

3、遠處后適應(yīng)心肌保護作用中PI3K-AKt-eNOS通路與鈉鈣交換蛋白的關(guān)系。
　　方法：
　　將40只兔子隨機分為5組，每組8只。（1）、對照組（Control組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎的血管（LAD）后用無損縫合線穿過，不阻斷，持續(xù)210min。(2)、缺血組（I/R組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎的血管（LAD），用無損縫合線阻斷，第30min時松開，恢復(fù)供血180min。（3）、遠處后適應(yīng)組（RIP組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎

4、的冠脈（LAD），用無損縫合線阻斷30min。并在第20min時夾閉左下肢股動脈，第25min時開放股動脈，第30min開放LAD，恢復(fù)血供180min。（4）、鈉鈣交換蛋白抑制劑組（NCXi組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎的冠脈（LAD）后用無損縫合線阻斷，在第30min時松開，并于松開前10min靜脈注射KB-R7943，劑量3mg/kg?；謴?fù)灌注180min。（5）、鈉鈣交換蛋白抑制劑+遠處后適應(yīng)組（NCXi+RIP組）：左側(cè)開胸，找到

5、需結(jié)扎的冠脈（LAD）后用無損縫合線阻斷，第20min時，夾閉左下肢股動脈，并且同時靜脈注射KB-R7943,劑量3mg/kg，第25分鐘5min開放股動脈。第30min時恢復(fù)LAD血供灌注持續(xù)180min。以上各個實驗組分別于阻斷左前降支前、持續(xù)灌流180min后從兔頸內(nèi)靜脈采血約3ml，運用自動生化儀檢測CK濃度。實驗結(jié)束后處死動物，取心梗處心肌組織，用tunel法測心肌凋亡指數(shù)；用Western-Bolt法及RT-PCR法測定心肌

6、組織中相關(guān)蛋白及mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1、肌酸激酶的測定結(jié)果：在阻斷左前降支之前，各組CK值無明顯差異(p>0.05)。阻斷結(jié)束后180min時，Control組CK含量與阻斷之前相比無顯著變化(p>0.05)，剩余四組CK值均較阻斷前升高（p<0.01）。其中，以I/R組Ck含量最高，NCXi組高于RIP組（p<0.01），NCXi+RIP組CK含量最低（p<0.01)
　　2、心肌細胞凋亡指數(shù)：Cont

7、rol組心肌細胞凋亡率明顯低于其余四組（p<0.01）,其余四組中I/R組心肌細胞凋亡率最高（p<0.01），NCXi+RIP組中心肌細胞凋亡率最低（p<0.01），RIP組心肌細胞凋亡率較NCXi組低（p<0.05）。
　　3、心肌組織p-AKt蛋白表達：I/R組p-AKt蛋白表達與control組相比輕度升高（p<0.05），余三組均較對照組明顯升高，NCXi組p-AKt、eNOS表達低于RIP組及NCXi+RIP組（p<0.

8、01），RIP組p-AKt蛋白表達與NCXi+RIP組相比較低（p<0.01）。
　　4、心肌組織eNOS蛋白表達結(jié)果：Control組eNOS表達最低（p<0.01），余四組均較對照組明顯升高，I/R組eNOS表達較NCXi組低（p<0.01），NCXi組eNOS表達低于RIP組（p<0.01），RIP組eNOS蛋白表達與NCXi+RIP組相比較低（p<0.01）。
　　5、心肌組織NCX蛋白表達結(jié)果：各組中Control

9、組NCX表達水平最低（p<0.01），I/R組NCX表達水平最高（p<0.01）。余三組中NCXi+RIP組中NCX表達水平最低（p<0.01）,輕度低于NCXi組（p<0.01）。RIP組NCX表達量高于NCXi組（p<0.01）。
　　6、心肌組織eNOS mRNA檢測結(jié)果：各組中Control組eNOS mRNA表達水平最低（p<0.01），余四組均高于Contro組，其中I/R組最低（p<0.01），NCXi+RIP組最高

10、（p<0.01），RIP組高于NCXi'組（p<0.01）。
　　7、NCX mRNA檢測結(jié)果：Control組NCX mRNA含量顯著低于其余四組（p<0.01），其中I/R組中NCX mRNA含量最高（p<0.01），RIP+NCXi組NCX mRNA含量低于NCXi組（ p<0.01）， NCXi組NCX mRNA含量低于RIP組（p<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、遠處后適應(yīng)可能通過活化PI3k-AKt-eN