鈉鈣交換蛋白與遠(yuǎn)處后適應(yīng)心肌保護(hù)作用相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：
　　冠心病作為對(duì)人類最具威脅的疾病之一，盡快使閉塞的冠脈血供恢復(fù)仍是當(dāng)前主要治療措施，盡管多數(shù)情況下能夠使患者病情好轉(zhuǎn)康復(fù)，但有時(shí)伴隨著血管再通，心肌恢復(fù)供血后反而出現(xiàn)心率失常及器質(zhì)性損傷等，對(duì)機(jī)體造成第二次打擊，引起再灌注損傷。鈣離子（Ca2+）在再灌注損傷中發(fā)揮重要作用，找到一種能夠有效減輕缺血-再灌注損傷的方法已經(jīng)是當(dāng)今相關(guān)領(lǐng)域主要研究方向。遠(yuǎn)處后適應(yīng)（RIP）具有可操作性強(qiáng)、對(duì)靶器官損傷小的優(yōu)點(diǎn)，一經(jīng)發(fā)現(xiàn)后便迅

2、速受到研究人員的關(guān)注，但其確切機(jī)制十分復(fù)雜，目前尚不特別清楚，有研究表明其主要機(jī)制是激活細(xì)胞內(nèi)PI3k-AKt-eNOS通路進(jìn)而激活下游靶分子，這些靶分子具有保護(hù)心肌細(xì)胞功能的作用。另有研究表明，鈉鈣交換蛋白（NCX）在再灌注過程中承擔(dān)著將鈣離子轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi)的角色，遠(yuǎn)處后適應(yīng)過程中亦存在NCX逆向轉(zhuǎn)運(yùn)的抑制。在遠(yuǎn)處后適應(yīng)期間，PI3k-AKt-eNOS通路與鈉鈣交換蛋白的抑制是否存在聯(lián)系，尚無相關(guān)報(bào)道。
　　目的：
　　探討

3、遠(yuǎn)處后適應(yīng)心肌保護(hù)作用中PI3K-AKt-eNOS通路與鈉鈣交換蛋白的關(guān)系。
　　方法：
　　將40只兔子隨機(jī)分為5組，每組8只。（1）、對(duì)照組（Control組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎的血管（LAD）后用無損縫合線穿過，不阻斷，持續(xù)210min。(2)、缺血組（I/R組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎的血管（LAD），用無損縫合線阻斷，第30min時(shí)松開，恢復(fù)供血180min。（3）、遠(yuǎn)處后適應(yīng)組（RIP組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎

4、的冠脈（LAD），用無損縫合線阻斷30min。并在第20min時(shí)夾閉左下肢股動(dòng)脈，第25min時(shí)開放股動(dòng)脈，第30min開放LAD，恢復(fù)血供180min。（4）、鈉鈣交換蛋白抑制劑組（NCXi組）：左側(cè)開胸，找到需結(jié)扎的冠脈（LAD）后用無損縫合線阻斷，在第30min時(shí)松開，并于松開前10min靜脈注射KB-R7943，劑量3mg/kg?；謴?fù)灌注180min。（5）、鈉鈣交換蛋白抑制劑+遠(yuǎn)處后適應(yīng)組（NCXi+RIP組）：左側(cè)開胸，找到

5、需結(jié)扎的冠脈（LAD）后用無損縫合線阻斷，第20min時(shí)，夾閉左下肢股動(dòng)脈，并且同時(shí)靜脈注射KB-R7943,劑量3mg/kg，第25分鐘5min開放股動(dòng)脈。第30min時(shí)恢復(fù)LAD血供灌注持續(xù)180min。以上各個(gè)實(shí)驗(yàn)組分別于阻斷左前降支前、持續(xù)灌流180min后從兔頸內(nèi)靜脈采血約3ml，運(yùn)用自動(dòng)生化儀檢測(cè)CK濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死動(dòng)物，取心梗處心肌組織，用tunel法測(cè)心肌凋亡指數(shù)；用Western-Bolt法及RT-PCR法測(cè)定心肌

6、組織中相關(guān)蛋白及mRNA的表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、肌酸激酶的測(cè)定結(jié)果：在阻斷左前降支之前，各組CK值無明顯差異(p>0.05)。阻斷結(jié)束后180min時(shí)，Control組CK含量與阻斷之前相比無顯著變化(p>0.05)，剩余四組CK值均較阻斷前升高（p<0.01）。其中，以I/R組Ck含量最高，NCXi組高于RIP組（p<0.01），NCXi+RIP組CK含量最低（p<0.01)
　　2、心肌細(xì)胞凋亡指數(shù)：Cont

7、rol組心肌細(xì)胞凋亡率明顯低于其余四組（p<0.01）,其余四組中I/R組心肌細(xì)胞凋亡率最高（p<0.01），NCXi+RIP組中心肌細(xì)胞凋亡率最低（p<0.01），RIP組心肌細(xì)胞凋亡率較NCXi組低（p<0.05）。
　　3、心肌組織p-AKt蛋白表達(dá)：I/R組p-AKt蛋白表達(dá)與control組相比輕度升高（p<0.05），余三組均較對(duì)照組明顯升高，NCXi組p-AKt、eNOS表達(dá)低于RIP組及NCXi+RIP組（p<0.

8、01），RIP組p-AKt蛋白表達(dá)與NCXi+RIP組相比較低（p<0.01）。
　　4、心肌組織eNOS蛋白表達(dá)結(jié)果：Control組eNOS表達(dá)最低（p<0.01），余四組均較對(duì)照組明顯升高，I/R組eNOS表達(dá)較NCXi組低（p<0.01），NCXi組eNOS表達(dá)低于RIP組（p<0.01），RIP組eNOS蛋白表達(dá)與NCXi+RIP組相比較低（p<0.01）。
　　5、心肌組織NCX蛋白表達(dá)結(jié)果：各組中Control

9、組NCX表達(dá)水平最低（p<0.01），I/R組NCX表達(dá)水平最高（p<0.01）。余三組中NCXi+RIP組中NCX表達(dá)水平最低（p<0.01）,輕度低于NCXi組（p<0.01）。RIP組NCX表達(dá)量高于NCXi組（p<0.01）。
　　6、心肌組織eNOS mRNA檢測(cè)結(jié)果：各組中Control組eNOS mRNA表達(dá)水平最低（p<0.01），余四組均高于Contro組，其中I/R組最低（p<0.01），NCXi+RIP組最高

10、（p<0.01），RIP組高于NCXi'組（p<0.01）。
　　7、NCX mRNA檢測(cè)結(jié)果：Control組NCX mRNA含量顯著低于其余四組（p<0.01），其中I/R組中NCX mRNA含量最高（p<0.01），RIP+NCXi組NCX mRNA含量低于NCXi組（ p<0.01）， NCXi組NCX mRNA含量低于RIP組（p<0.01）。
　　結(jié)論：
　　1、遠(yuǎn)處后適應(yīng)可能通過活化PI3k-AKt-eN