羊棲菜巖藻黃質(zhì)的提取及理化性質(zhì)研究.pdf

1、巖藻黃質(zhì)是褐藻的特征性色素，具有抗癌、抗衰老、減肥、調(diào)節(jié)血糖含量等多種生理功能。目前，海帶和裙帶菜中的巖藻黃質(zhì)研究較多，羊棲菜巖藻黃質(zhì)鮮有報(bào)道。羊棲菜屬于褐藻門馬尾藻科，富含多糖、蛋白質(zhì)、巖藻甾醇等多種功能物質(zhì)，被中國藥典規(guī)定為中藥海藻，在我國沿海分布廣泛，并且浙江建有大型人工養(yǎng)殖基地。
　　 本研究以產(chǎn)自浙江洞頭的羊棲菜為原料，應(yīng)用高效液相色譜(HPLC)技術(shù)建立了一種巖藻黃質(zhì)的檢測方法;在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用正交試驗(yàn)或響應(yīng)

2、面Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)分別對溶劑浸提、酶法提取、超聲波輔助提取、超臨界CO2萃取等四種巖藻黃質(zhì)提取方法進(jìn)行了工藝優(yōu)化;選用大孔吸附樹脂對溶劑浸提法提取的巖藻黃質(zhì)粗品進(jìn)行了純化工藝研究;采用紫外分光光度法考察了光照、溫度、pH、氧化劑、抗氧化劑對巖藻黃質(zhì)產(chǎn)品的穩(wěn)定性影響;應(yīng)用不同的體外抗氧化活性體系對巖藻黃質(zhì)產(chǎn)品的抗氧化活性進(jìn)行初步研究。旨在為巖藻黃質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù)和方法參考，同時，為其抗氧化功能的深入研究奠定基礎(chǔ)。主

3、要結(jié)論如下:
　　 (1)建立了巖藻黃質(zhì)的HPLC檢測方法，檢測條件為色譜柱Hypersil ODS C-18（Thermo，4.6 mm×250 mm×5μm），UWD450 nm，柱溫30℃，流動相為甲醇/乙腈/0.1％醋酸銨溶液(V/V/V75∶15∶10)，流速1mL/min，進(jìn)樣量20μL。該方法平均回收率達(dá)97.94％，且精密度和穩(wěn)定性良好。可用于巖藻黃質(zhì)的定性定量檢測。
　　 (2)優(yōu)化了不同方法提取巖藻黃

4、質(zhì)的最佳工藝條件，溶劑浸提為90％乙醇和丙酮體積比3∶1混合為提取溶劑，液料比40∶1，65℃水浴加熱提取2次，每次80 min，提取率1.067 mg/g，純度1.302％;酶法提取為纖維素酶用量120 U/g，酶解溫度45℃，酶解時間11h，提取率0.958mg/g，純度1.419％;超聲波輔助提取為超聲時間22 min，功率530 W，液料比40 mL/g，提取率1.202 mg/g，純度2.02％;超臨界CO2萃取為溫度55℃，

5、壓強(qiáng)315 bar，時間2.5 h，提取率0.621 mg/g，純度7.36％。超聲波輔助提取的巖藻黃質(zhì)提取率最大，超臨界CO2萃取的巖藻黃質(zhì)純度最高，可根據(jù)需要和生產(chǎn)條件選擇合適的生產(chǎn)工藝。
　　 (3)比較了8種大孔吸附樹脂對巖藻黃質(zhì)粗品中巖藻黃質(zhì)與葉綠素的靜態(tài)吸附與解吸能力，選取吸附和解吸效果較好的D101樹脂進(jìn)行動態(tài)純化試驗(yàn)，在上樣流速為1.6 BV/h的基礎(chǔ)上，最佳上樣濃度為葉綠素0.5157 mg/mL，相應(yīng)的巖藻黃

6、質(zhì)濃度為0.1499 mg/mL，最大吸附量為12 BV，洗脫劑最大用量80％乙醇11 BV洗脫巖藻黃質(zhì)，丙酮4 BV洗脫葉綠素，D101樹脂重復(fù)使用7次后需進(jìn)行再生處理。巖藻黃質(zhì)純度平均達(dá)8.57％，比純化前提高了約5.6倍，回收率平均為83.29％。此純化工藝獲得巖藻黃質(zhì)和葉綠素兩種產(chǎn)品，經(jīng)濟(jì)有效，操作簡便，適于工業(yè)化生產(chǎn)。但由于D101樹脂同時吸附巖藻黃質(zhì)和葉綠素，使二者不能完全分離，加之少量油脂性物質(zhì)的存在，巖藻黃質(zhì)的純度未達(dá)到

7、理想值。
　　 (4)考察了光照、溫度、pH、氧化劑及抗氧化劑對巖藻黃質(zhì)穩(wěn)定性的影響。得出巖藻黃質(zhì)在光照和高溫下不穩(wěn)定，對強(qiáng)酸、強(qiáng)堿比較敏感，易被氧化劑氧化分解，而在抗氧化劑存在的條件下比較穩(wěn)定。因此，巖藻黃質(zhì)的保存和運(yùn)輸過程要注意避免光照、高溫以及與氧化性物質(zhì)、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿的長時間接觸，可適當(dāng)添加抗氧化劑。
　　 (5)進(jìn)行了巖藻黃質(zhì)體外抗氧化活性的研究，發(fā)現(xiàn)巖藻黃質(zhì)的還原力低于VC、VE，但是對DPPH·、·OH、O2

8、-·等自由基及H2O2有較強(qiáng)的清除能力，且對·OH、O2-·的清除能力高于VC。此外，巖藻黃質(zhì)的抗脂質(zhì)過氧化功能也明顯強(qiáng)于VC。由此證明，巖藻黃質(zhì)有較強(qiáng)的抗氧化性，有望成為一種抗氧化成分添加到食品、藥品、保健品及化妝品中。
　　 本文首次以羊棲菜為原料，系統(tǒng)研究了巖藻黃質(zhì)的分離提取技術(shù)、純化工藝、穩(wěn)定性及抗氧化性，解決了巖藻黃質(zhì)來源單一、提取率低、難于保存等關(guān)鍵問題，同時豐富了對其生物活性方面的研究。為巖藻黃質(zhì)的工業(yè)化生產(chǎn)與應(yīng)用