羊棲菜多糖的提取分離、生物活性及結(jié)構(gòu)鑒定.pdf

1、論文主要采用微波輔助處理和優(yōu)化羊棲菜多糖提取工藝，通過(guò)超濾膜技術(shù)對(duì)羊棲菜多糖進(jìn)行分離，并對(duì)不同分子量段的羊棲菜多糖（SFPS）進(jìn)行體外抗氧化活性分析，在此基礎(chǔ)上選取體外抗氧化活性較高的分子量段多糖進(jìn)行體內(nèi)抗疲勞及小鼠水迷宮實(shí)驗(yàn)，并對(duì)該分子量段多糖進(jìn)行純化和結(jié)構(gòu)分析。
　　論文以羊棲菜為原料，微波輔助萃取技術(shù)提取羊棲菜多糖，在單因素實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面設(shè)計(jì)方法研究羊棲菜多糖提取的最優(yōu)工藝條件。微波輔助水提法提取羊棲菜多糖的最佳工藝

2、條件為：液料比34mL/g，微波時(shí)間8min，水提溫度95℃，提取時(shí)間2.1h。此優(yōu)化條件下，羊棲菜多糖得率為11.51％±0.12%。
　　通過(guò)超濾膜技術(shù)（分別為10萬(wàn)，5萬(wàn)，1萬(wàn)，5千）將羊棲菜多糖進(jìn)行分離，并對(duì)不同分子量段羊棲菜多糖進(jìn)行體外抗氧化活性分析，結(jié)果表明：不同分子量段羊棲菜多糖均具有較強(qiáng)抗氧化能力，其中對(duì)羥自由基、DPPH·自由基清除效果更明顯，對(duì)超氧陰離子的清除作用相對(duì)較弱，自由基清除率均隨多糖濃度的增加而增加，

3、呈現(xiàn)量效關(guān)系，相對(duì)分子量越小其自由基清除能力相對(duì)越強(qiáng)。
　　對(duì)不同分子量段羊棲菜多糖（SFPSⅤ、SFPSⅣ、粗多糖）進(jìn)行小鼠學(xué)習(xí)記憶能力試驗(yàn)，采用120只昆明小鼠（雌雄各半），并隨機(jī)分為12組：正常對(duì)照組、消旋山莨菪堿所致記憶獲得性障礙模型組、吡拉西坦（腦復(fù)康）陽(yáng)性對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組為不同分子量段羊棲菜多糖高劑量組（0.4 g/kg）、中劑量組（0.3 g/kg）、低劑量組（0.2 g/kg）。連續(xù)灌胃15 d，進(jìn)行Morr

4、is水迷宮試驗(yàn)測(cè)試各組的學(xué)習(xí)記憶能力；測(cè)試前20 min，除正常對(duì)照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均注射消旋山莨菪堿，以此建立消旋山莨菪堿記憶獲得性障礙模型，測(cè)試結(jié)束后檢測(cè)各組血清T-AOC、SOD活性和MDA含量。結(jié)果表明：羊棲菜多糖對(duì)記憶障礙小鼠學(xué)習(xí)記憶能力具有一定的改善作用，中劑量
　　SFPSⅤ與模型組相比，小鼠平均逃避潛伏期明顯縮短，穿越次數(shù)明顯增加（P＜0.05）；不同分子量段羊棲菜多糖對(duì)小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力改善程度不同

5、，低分子量段多糖效果最佳，且優(yōu)于腦復(fù)康的效果（P＜0.05）；羊棲菜多糖改善消旋山莨菪堿記憶獲得性障礙模型小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，其機(jī)制可能與羊棲菜多糖的抗氧化能力有關(guān)；研究結(jié)果對(duì)羊棲菜多糖的利用及活性研究具有一定的指導(dǎo)作用。
　　對(duì)不同分子量段羊棲菜多糖（SFPSⅤ、SFPSⅣ、粗多糖）進(jìn)行小鼠抗疲勞作用試驗(yàn)。采用100只昆明小鼠（雌雄各半），并隨機(jī)分為10組：正常對(duì)照組、不同分子量段羊棲菜多糖高劑量組（0.3 g/kg）、中劑量組

6、（0.2 g/kg）、低劑量組（0.1 g/kg）。連續(xù)灌胃15 d后，進(jìn)行小鼠負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)，記錄小鼠體重、負(fù)重游泳力竭時(shí)間、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肝糖原、肌乳酸及血清尿素的含量。結(jié)果表明，羊棲菜多糖具有抗疲勞作用，羊棲菜多糖抗疲勞活性主要作用組分為低分子量段多糖，這為進(jìn)一步研究羊棲菜多糖活性機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為羊棲菜多糖抗疲勞保健食品的開(kāi)發(fā)與利用中提供新途徑。
　　羊棲菜多糖SFPSⅤ采用陰離子交換柱層析法經(jīng)不

7、同濃度NaCl梯度洗脫，得到三種電荷性質(zhì)相同的單一多糖組分0.1M SFPSⅤ、0.3M SFPSⅤ、0.5M SFPSⅤ，經(jīng)透析脫鹽，濃縮后分別過(guò)葡聚糖凝膠G-100層析柱進(jìn)一步洗脫，得到三種電荷性質(zhì)及分子量含量分布均一多糖純品0.1M SFPSⅤG-2、0.3M SFPSⅤG-1、0.5M SFPSⅤG-2。通過(guò)紅外光譜分析，三種純品均具有多糖特征吸收峰，存在糖環(huán)羥基伸縮振動(dòng)峰，-CH3、-CH2伸縮振動(dòng)峰，多糖水合振動(dòng)峰，糖苷鍵（

8、C-O-C）非對(duì)稱振動(dòng)峰（3，6-內(nèi)醚橋），S=O伸縮振動(dòng)峰（說(shuō)明存在硫酸基取代）；通過(guò)離子色譜分析，結(jié)果表明0.1M SFPSⅤG-2中主要存在葡萄糖組分，0.3M SFPSⅤG-1、0.5M SFPSⅤG-2均存在5種單糖，分別為葡萄糖、巖藻糖、半乳糖、木糖、甘露糖，前者出現(xiàn)兩組雜峰，后者出現(xiàn)一組雜峰；通過(guò)一維NMR光譜分析，證明SFPSⅤ存在五種單糖，其中0.1M SFPSⅤG-2存在3種α型吡喃糖、2種β吡喃糖，0.3M SFP