混合皮膚移植中自體角朊細(xì)胞表達(dá)B7-H1誘導(dǎo)免疫抑制的相關(guān)研究.pdf

1、目的：建立MELC體系（體外模擬混合皮膚移植模型），探討B(tài)7-H1分子在自體角朊細(xì)胞誘導(dǎo)的免疫抑制中的作用和相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：
　　 1.分離兩只不同KM乳鼠（a,b乳鼠新生1-3日齡，無毛發(fā)生長）的淋巴細(xì)胞，表皮細(xì)胞，角朊細(xì)胞，并用細(xì)胞免疫組織化學(xué)方法鑒定角朊細(xì)胞。
　　 2.用分離的淋巴細(xì)胞，表皮細(xì)胞，角朊細(xì)胞，建立MELC體系。引入自體角朊細(xì)胞，在體外模擬自體皮島效應(yīng)。
　　 3.在有自體角朊

2、細(xì)胞參與的與無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中，分別混合培養(yǎng)12h,24h,36h后，分離角朊細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測B7-H1的表達(dá)。同樣條件下分離淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測PD-1的表達(dá)。
　　 4.在有自體角朊細(xì)胞參與的與無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中，分別混合培養(yǎng)12h,24h,36h后，分離淋巴細(xì)胞，提取RNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測IL-10,Foxp3,GATA-3 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　

3、 1.分離得到的淋巴細(xì)胞,表皮細(xì)胞活性好，存活率高。分離的角朊細(xì)胞純度高，活性好，存活率高，采用細(xì)胞免疫組織化學(xué)鑒定，陽性率高。
　　 2.原代培養(yǎng)的角朊細(xì)胞，表皮細(xì)胞，淋巴細(xì)胞建立的MELC體系穩(wěn)定，混合培養(yǎng)穩(wěn)定。
　　 3.在有自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中，12h,24h,36h后，分離角朊細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測B7-H1表達(dá)呈逐漸升高趨勢，有顯著差異(P<0.05)。同樣條件下分離淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測PD-

4、1,表達(dá)呈升高趨勢，有顯著差異(P<0.05)。而無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中，角朊細(xì)胞，淋巴細(xì)胞均無顯著差異（P>0.05)。
　　 4.在有自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中，12h,24h,36h后，分離淋巴細(xì)胞，提取RNA，實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測IL-10,Foxp3,GATA-3的表達(dá)呈升高趨勢,有顯著差異(P<0.05)。而無自體角朊細(xì)胞參與的MELC體系中,無以上表達(dá)趨勢，均無顯著差異（P>0.05)。