混合皮膚移植中自體角朊細胞表達B7-H1誘導免疫抑制的相關(guān)研究.pdf

1、目的：建立MELC體系（體外模擬混合皮膚移植模型），探討B(tài)7-H1分子在自體角朊細胞誘導的免疫抑制中的作用和相關(guān)機制。
　　 方法：
　　 1.分離兩只不同KM乳鼠（a,b乳鼠新生1-3日齡，無毛發(fā)生長）的淋巴細胞，表皮細胞，角朊細胞，并用細胞免疫組織化學方法鑒定角朊細胞。
　　 2.用分離的淋巴細胞，表皮細胞，角朊細胞，建立MELC體系。引入自體角朊細胞，在體外模擬自體皮島效應。
　　 3.在有自體角朊

2、細胞參與的與無自體角朊細胞參與的MELC體系中，分別混合培養(yǎng)12h,24h,36h后，分離角朊細胞，流式細胞術(shù)檢測B7-H1的表達。同樣條件下分離淋巴細胞，流式細胞術(shù)檢測PD-1的表達。
　　 4.在有自體角朊細胞參與的與無自體角朊細胞參與的MELC體系中，分別混合培養(yǎng)12h,24h,36h后，分離淋巴細胞，提取RNA，實時熒光定量PCR檢測IL-10,Foxp3,GATA-3 mRNA的表達。
　　 結(jié)果：
　　

3、 1.分離得到的淋巴細胞,表皮細胞活性好，存活率高。分離的角朊細胞純度高，活性好，存活率高，采用細胞免疫組織化學鑒定，陽性率高。
　　 2.原代培養(yǎng)的角朊細胞，表皮細胞，淋巴細胞建立的MELC體系穩(wěn)定，混合培養(yǎng)穩(wěn)定。
　　 3.在有自體角朊細胞參與的MELC體系中，12h,24h,36h后，分離角朊細胞，流式細胞術(shù)檢測B7-H1表達呈逐漸升高趨勢，有顯著差異(P<0.05)。同樣條件下分離淋巴細胞，流式細胞術(shù)檢測PD-

4、1,表達呈升高趨勢，有顯著差異(P<0.05)。而無自體角朊細胞參與的MELC體系中，角朊細胞，淋巴細胞均無顯著差異（P>0.05)。
　　 4.在有自體角朊細胞參與的MELC體系中，12h,24h,36h后，分離淋巴細胞，提取RNA，實時熒光定量PCR檢測IL-10,Foxp3,GATA-3的表達呈升高趨勢,有顯著差異(P<0.05)。而無自體角朊細胞參與的MELC體系中,無以上表達趨勢，均無顯著差異（P>0.05)。