過表達(dá)CCR7的C3H10 T1-2細(xì)胞在小鼠皮膚移植模型的免疫抑制作用的研究.pdf

1、在整形外科領(lǐng)域，會(huì)經(jīng)常面對(duì)由大面積燒傷、創(chuàng)傷、腫瘤切除帶來的機(jī)體組織及器官缺損及功能障礙。相比于自體組織移植修復(fù)，異體復(fù)合組織移植(CTA)無疑是目前臨床可選的最可靠的一種修復(fù)手段。但是移植術(shù)后的免疫排斥反應(yīng)一直是異體復(fù)合組織移植難以逾越的障礙。目前臨床上主要使用各類免疫抑制藥物來避免和減輕移植后的免疫排斥反應(yīng)，但有效的免疫抑制藥物不僅費(fèi)用高昂，而且伴有增加感染風(fēng)險(xiǎn)以及惡性腫瘤發(fā)生幾率的副作用，長(zhǎng)期使用帶來的血液系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及肝腎功能

2、的損害更會(huì)嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量。近年來，人們發(fā)現(xiàn)了間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)具有調(diào)控移植免疫的能力，MSCs獨(dú)有的便捷性、安全性更是讓其成為了研究熱點(diǎn)。經(jīng)過多年研究，間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)于移植后免疫反應(yīng)的調(diào)節(jié)能力已得到了學(xué)界的廣泛肯定，在臨床試驗(yàn)性治療中也得到了認(rèn)可。
　　目前MSC的免疫抑制作用機(jī)制尚不完全清楚，一般認(rèn)為間充質(zhì)干細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能可能是通過分泌各種細(xì)胞因子以及對(duì)免疫細(xì)胞的直接接觸而產(chǎn)生抑制作用。次級(jí)淋巴器官(SLOs)

3、已被發(fā)現(xiàn)在MSC的移植免疫調(diào)節(jié)中起著至關(guān)重要的作用。而MSC進(jìn)行GVHD治療的效果不夠理想，很有可能是緣于全身注射治療后細(xì)胞歸巢的低效引起的。CC趨化因子受體7[CCR7]是一類趨化因子受體，其配體為趨化因子配體21[CCL21]，由次級(jí)淋巴器官組織分泌。CCL21可以誘導(dǎo)表達(dá)CCR7的細(xì)胞定向趨化至脾臟、淋巴結(jié)等次級(jí)淋巴器官。C3H10 T1/2細(xì)胞系是符合間充質(zhì)干細(xì)胞定義的，在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用廣泛的小鼠間充質(zhì)干細(xì)胞系，具有細(xì)胞類型單一、生

4、長(zhǎng)快速穩(wěn)定等特點(diǎn)。
　　為進(jìn)一步探討表達(dá)CCR7的MSC在復(fù)合組織移植中的免疫調(diào)節(jié)作用，本研究通過建立同種異系小鼠背部皮膚移植模型，以輸注正常和轉(zhuǎn)染并表達(dá)CCR7的C3H10 T1/2細(xì)胞(MSCs)為干預(yù)手段，觀察皮片移植12d后存活面積、HE染色皮片病理變化及小鼠脾淋巴細(xì)胞中Th17細(xì)胞、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)細(xì)胞表達(dá)比例，用以綜合評(píng)估CCR7的表達(dá)對(duì)MSCs在移植小鼠體內(nèi)的免疫調(diào)節(jié)能力的影響。
　　目的:旨在研究小鼠

5、CCR7+ MSCs間充質(zhì)干細(xì)胞系是否在小鼠皮膚移植模型中具有比原始C3H10細(xì)胞具有更強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　方法:以穩(wěn)定的小鼠C3H10細(xì)胞系培養(yǎng)擴(kuò)增細(xì)胞，并利用慢病毒工具轉(zhuǎn)染EGFP-CCR7基因;以C57BL6小鼠為供體獲取皮片，以BALB/c小鼠為受體建立小鼠同種異系皮膚移植模型;實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分4組:CCR7+細(xì)胞組、C3H10組、同種異系對(duì)照組和同系對(duì)照組（受者小鼠移植同系小鼠皮片），分別于移植模型成功當(dāng)天經(jīng)尾靜脈注射1×

6、106 CCR7+C3H10細(xì)胞、1×106C3H10細(xì)胞、等體積生理鹽水（對(duì)照組）;觀察皮片移植后的存活情況，并于皮片移植第12天測(cè)定小鼠脾淋巴細(xì)胞中TH17與Treg的細(xì)胞比例，HE染色觀察皮片病理變化。
　　結(jié)果:受者小鼠皮片移植后12天，外觀、病理以及流式細(xì)胞結(jié)果表明CCR7+組與C3H10組的皮片存活情況均優(yōu)于同種異系對(duì)照組，CCR7+組皮片移植后存活情況優(yōu)于C3H10組，且移植免疫反應(yīng)程度輕于C3H10組。