低氧、環(huán)境雌激素和酸化不同環(huán)境脅迫因子對海水青鳉hepcidin表達的影響研究.pdf

1、海洋生態(tài)系統(tǒng)的復(fù)雜性使海洋生物面臨低氧、酸化、環(huán)境污染物等多重環(huán)境脅迫，特別是沿海海域的海洋生物。研究表明低氧、酸化及環(huán)境雌激素EE2均能影響生物體的生長、發(fā)育、繁殖及基因表達等。Hepcidin是一類與防御素類似的富含半胱氨酸的抗菌肽，除具有抗菌功能外還參與機體鐵代謝;貧血、缺氧、致炎物質(zhì)以及細胞因子等均會影響其表達。本論文在實驗室前期研究分離獲得的海水青鳉（Oryziasmelastigma）hepcidin兩種變體基因OM-hep

2、1和OM-hep2以及黑鯛(Acanthopagrusschlegelii)hepcidin2（AS-hep2）基因的基礎(chǔ)上，研究低氧對黑鯛hepcidin2及其相關(guān)調(diào)控基因表達的影響;探究單獨低氧、單獨酸化以及低氧與EE2聯(lián)合作用對海水青鳉hepcidin及其相關(guān)調(diào)控基因表達的影響。主要結(jié)論如下:
　　1.分析了低氧刺激下海水青鳉OM-hep1和OM-hep2基因、HIF(HpoxiaInducibleFactor)、IL-6/

3、STAT3以及NF-κB基因的表達模式。實時熒光定量PCR(Real-timePCR)結(jié)果顯示在低氧條件下OM-hep1和OM-hep2基因表現(xiàn)出不同的表達特性，可能與其不同的生理學(xué)功能相關(guān)。HIF途徑中的OM-HIF-1α和OM-VEGF(VascularEndothelialGrowthFactor)基因表達未受低氧影響，OM-EPO(Eythropoietin)基因被低氧顯著性誘導(dǎo)，且表達量與氧濃度呈負(fù)相關(guān)，氧濃度越低表達量越高，

4、因此該基因可以用作檢測低氧的指示基因。低氧對OM-IL-6和OM-STAT3基因表達的影響作用短暫，可能是機體對低氧的一種應(yīng)激反應(yīng)。NF-κB基因OM-p65在低氧刺激下的表達模式與OM-hep2相同，與OM-hep1的表達沒有相關(guān)性，推測OM-hep2的表達可能通過NF-κB途徑介導(dǎo)。
　　2.研究了低氧條件下黑鯛AS-hep2和AS-HIF-1α的表達特性。AS-hep2在低氧刺激下表達上調(diào)，在96h時被顯著性誘導(dǎo)表達。這表明

5、AS-hep2可能在低氧刺激下發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)功能。AS-HIF-1α基因不受低氧的影響。
　　3.分析了環(huán)境濃度EE2和低氧聯(lián)合刺激對OM-hep1、OM-hep2、OM-HIF-1α、OM-VEGF和OM-EPO基因表達的影響。OM-HIF-1α基因在刺激后48h和96h被誘導(dǎo)表達;OM-VEGF基因在刺激后96h表達上調(diào);而OM-EPO基因在刺激后的3-96h均顯著性上調(diào)表達，且高于單獨低氧的誘導(dǎo)作用。表明這三個基因都受環(huán)境濃度

6、EE2和低氧聯(lián)合刺激的誘導(dǎo)，OM-EPO對環(huán)境濃度EE2和低氧共同作用的敏感性高于OM-HIF-1α和OM-VEGF。環(huán)境濃度EE2與低氧共同作用對OM-hep1和OM-hep2基因的表達沒有顯著影響。
　　4.探討了酸化刺激對海水青鳉發(fā)育過程中OM-hep1、OM-hep2和OM-CYP1A基因的表達影響。OM-hep1和OM-hep2的基因隨著胚胎發(fā)育表達上調(diào)，推測hepcidin在胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮了免疫作用。研究發(fā)現(xiàn)，OM