乙肝肝硬化患者外周血單個(gè)核細(xì)胞TLRs的表達(dá)及其血清內(nèi)毒素的關(guān)系.pdf

1、背景和目的:內(nèi)毒素(endotoxin)存在于革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁,為脂多糖的復(fù)合體(lipopolysaccharides,LPS),是革蘭氏陰性菌的主要致病成分,細(xì)菌的內(nèi)毒素可以引起內(nèi)毒素血癥。肝硬化患者易并發(fā)內(nèi)毒素血癥,而且血液中內(nèi)毒素水平與肝功能損害程度有關(guān)。細(xì)菌感染或內(nèi)毒素所致的炎癥反應(yīng)嚴(yán)重程度與肝硬化病人的天然免疫有關(guān),天然免疫為機(jī)體抵御外界病原體的第一道防線。最近有資料顯示哺乳動(dòng)物Toll樣受體(toll-likerece

2、ptors,TLR)參與了由內(nèi)毒素或其他病原體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo),其中最關(guān)鍵的是TLR2和TLR4分子。在先天性免疫中,TLR被看作是觸發(fā)抗微生物反應(yīng)的關(guān)鍵成分。
　　 因此,本研究的目的在于:1)檢測(cè)乙肝肝硬化患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(Peripheralbloodmononuclearcell,PMBC)TLR2和TLR4mRNA的表達(dá):2)探索TLR2/TLR4mRNA表達(dá)與血清內(nèi)毒素及腫瘤壞死因子-α(tumornecro

3、sisfactor-α,TNF-α)的關(guān)系,闡明TLR2/TLR4在乙肝肝硬化內(nèi)毒素血癥中的作用。
　　 方法:入選的29例乙肝肝硬化病人均符合2001年病毒性肝炎和肝硬化的診斷標(biāo)準(zhǔn)。除外以下情況:(1)近6周內(nèi)使用過(guò)免疫調(diào)節(jié)藥物;(2)腎功能不全(肌苷＞120umol/L);(3)合并腫瘤患者;(4)無(wú)飲酒史(每日飲酒量少于20g):(5)6周內(nèi)無(wú)明確感染的或使用抗生素者。肝功能損害程度以Child-Pugh為分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。按性別

4、和年齡匹配選擇無(wú)肝炎病史的健康志愿者10例為正常對(duì)照,要求肝功能檢測(cè)正常,無(wú)飲酒史。抽取患者外周靜脈血7ml,其中5ml留置在經(jīng)脫酶處理的抗凝管內(nèi),采用淋巴細(xì)胞分離液(Ficoll)分離得到單個(gè)核細(xì)胞;采用RT-PER半定量分析TLR2和TLR4mRNA水平;另外2ml留置在無(wú)內(nèi)毒素的試管內(nèi)分離血清,分離的血清儲(chǔ)存在-70℃的冰箱里,用鱟試劑定量測(cè)定血清內(nèi)毒素水平和采用放免法測(cè)定血清中TNF-α水平。
　　 結(jié)果:(1)血清內(nèi)毒

5、素水平和血清TNF-α水平的變化:與正常對(duì)照比較,肝硬化患者血清內(nèi)毒素水平(分別為0.050EU/ml和0.107EU/mlP＜0.05)和血清TNF-α水平(分別為:1.282pg/ml和2.076pg/ml,P＜0.05)均明顯升高;(2)外周血單個(gè)核細(xì)胞中TLR2和TLR4mRNA受體的表達(dá):與正常對(duì)照比較,肝硬化患者外周血單個(gè)核細(xì)胞中TLR2的表達(dá)明顯升高(分別為:0.651和0.923,P＜0.05),且與血清內(nèi)毒素和TNF-