外周血單個核細(xì)胞中HBVDNA和HBVcccDNA對乙肝患者免疫功能的影響.pdf

1、目的：通過對PBMCs中HBVDNA和HBVcccDNA的檢測，證實不同臨床類型乙肝患者PBMCs被HBV感染的事實，比較PBMCs有或無HBV感染證據(jù)組中免疫功能的變化，探討HBV感染PBMCs后對乙肝患者特異性免疫功能的影響，以及HBV感染PBMCs后在疾病發(fā)生發(fā)展中的意義。 方法：1、研究對象：88例研究對象，其中包括正常健康者10例，慢性乙型肝炎患者78例(其中包括慢性乙肝攜帶者13例，慢性輕度乙肝患者15例，慢性中度乙

2、肝患者28例，慢性重度乙肝患者10例，慢性重型乙肝患者12例)。2、實驗方法和指標(biāo)：①提取PGM-HBV質(zhì)粒，用雙蒸水對質(zhì)粒進(jìn)行十倍梯度稀釋，建立的PGM-HBV濃度系列為3×10<'5>copies／ml-3×10<'2>copies／ml；②常規(guī)分離全血中的PBMCs，提取DNA，應(yīng)用實時熒光定量PCR方法檢測PBMCs中HBVDNA和HBVcccDNA;進(jìn)行PBMCs的培養(yǎng)，孵育72h后，收集PBMCs上清液，采用ELISA法檢測

3、IFN-Y和IL-10，并用MTT法檢測PBMCs的增殖活性。3、統(tǒng)計學(xué)方法：數(shù)據(jù)利用SPSSl3.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)處理，應(yīng)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(X±S)、t檢驗及相關(guān)分析等。 結(jié)果：1、血清HBVDNA陽性率最高，PBMCs中HBVcccDNA陽性率最低，且血清HBVDNA、PBMCs中HBVDNA和HBVcccDNA三者之間有顯著的直線相關(guān)關(guān)系。PBMCs中HBVcccDNA陽性組的HBVDNA水平高于PBMCs中HBVcccDN

4、A陰性組；PBMCs中HBVcccDNA僅能在HBVDNA陽性血清中才可檢測到。2、HBeAg陽性組中血清HBVDNA陽性率、PBMCs中HBVDNA陽性率和HBVcccDNA陽性率均顯著高于HBeAg陰性組。慢性乙型肝炎攜帶者、慢性輕度乙型肝炎、慢性中度乙型肝炎、慢性重度乙型肝炎、慢性重型乙型肝炎之間PBMCs中HBVcccDNA水平無顯著性差異(P>0.05)。3、慢性HBV感染者的IFN-γ水平低于正常對照組,IL-10水平高于正

5、常對照組,PBMCs的增殖活性低于正常對照組。血清HBVDNA(+)和血清HBVDNA(-兩組中,PBMCs的增殖活性和產(chǎn)生的IFN-Y水平均較低,PBMCs產(chǎn)生的IL-10水平增加,兩組間這些變化的差異有顯著性意義(P<0.05);PBMCs中HBVDNA(+)和HBVDNA(一)相比,IL-10水平、PBMCs的增殖活性也存在相似的改變,差異有顯著性意義(P<0.05),但I(xiàn)FN-γ水平的變化差異無顯著性意義(t=1.005,P>0

6、.05);PBMCs中HBVcccDNA陽性組,其PBMCs的增殖活性也明顯低于PBMCs中HBVcccDNA陰性組(t=2.049,P>0.05)。4、IFN-γ水平在慢性輕度乙肝和慢性重度乙肝之間有顯著差異(t=2.076,P<0.05);乙肝攜帶者IL-10水平高于慢性輕度乙肝、慢性中度乙肝、慢性重度乙肝、慢性重型乙肝的水平,其差異有顯著性(P<0.05);乙肝攜帶者PBMCs的增殖活性也高于慢性輕度乙肝、慢性中度乙肝、慢性重度乙

7、肝、慢性重型乙肝的水平,其差異有顯著性(P<0.05)。5、HBeAg(-)和HBeAg(+)組比,IFN-γ水平有顯著意義的增高(t=2.008,P<0.05),IL-10、PBMCs的增殖活性在兩組間均無顯著意義差異(P>0.05)。 結(jié)論:1、根據(jù)HBVcccDNA檢測結(jié)果陽性,進(jìn)一步證實HBV能感染PBMCs，并在其中復(fù)制。2、PBMCs中HBVcccDNA陽性與機體Thl／Th2細(xì)胞因子失衡有關(guān)，表現(xiàn)在IFN-γ水平下