去腎交感神經(jīng)對腎臟缺血再灌注的作用以及對心肌的影響.pdf

1、目的：
　　既往個別研究探討了腎臟交感神經(jīng)與腎臟缺血再灌注損傷的相互聯(lián)系，但結(jié)果不一，有待進(jìn)一步研究證實(shí)。本研究擬建立去腎交感神經(jīng)大鼠模型，研究去腎交感神經(jīng)對腎臟缺血再灌注損傷的作用，并初步探討對心臟的影響。
　　方法：
　　選擇雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠（體重200-280g）為研究對象，分為正常組（N組）、假手術(shù)組（Sham組）、去腎交感神經(jīng)組（renal sympathetic denervat

2、ion group, RSD組）、缺血再灌注組（ischemia-reperfusion group, I/R組）、去腎交感神經(jīng)+缺血再灌注組（R+I組），其中RSD組根據(jù)去腎交感神經(jīng)后時間點(diǎn)分為24小時組（R1組）、48小時組（R2組）和72小時組（R3組）。Sham組僅分離腎臟血管，RSD組分離雙腎動靜脈后用無菌棉紗蘸溶于10％苯酚無水乙醇溶液包裹雙腎動脈20分鐘，I/R組分離雙腎動靜脈后用無創(chuàng)動脈夾夾閉雙腎動脈45分鐘后松開，R+

3、I組則根據(jù)R1組、R2組和R3組的去甲腎上腺素水平判斷去腎交感神經(jīng)成功后時間再開始I/R。除N組直接開腹留取動物標(biāo)本外，其余組均在術(shù)后24小時留取動物標(biāo)本進(jìn)行分子生物學(xué)及組織學(xué)研究。
　?。?）通過全自動生化儀測定血肌酐、尿素氮、胱抑素 C水平， ELISA法測定血漿中性粒細(xì)胞明膠酶相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin, NGAL)，以及腎臟HE染色以判斷腎臟功能及

4、損傷狀況；通過全自動生化儀測定血漿的肌酸激酶同工酶 MB（creatine kinase isoenzyme MB, CK-MB）以及HE染色了解心肌的損傷程度。
　?。?）高效液相色譜法(high performance liquid chromatography, HPLC)測定腎臟和心臟組織的去甲腎上腺素濃度以判斷去腎交感神經(jīng)是否成功及各組交感神經(jīng)的興奮狀態(tài)。
　?。?）通過Western-blot檢測腎臟和心臟組織的

5、NF-E2相關(guān)因子2（nuclear factor erythroid2-related factor2, Nrf2）和血紅素加氧酶1（heme oxygenase-1, HO-1）的表達(dá)水平，并通過測定組織的丙二醛（MDA）和超氧化物氣化酶（superoxide gasification enzyme, SOD）濃度以了解氧化應(yīng)激水平。
　　（4）通過Western-blot檢測腎臟和心臟組織的微管相關(guān)蛋白1輕鏈3（microt

6、ubule-associated protein1 light chain3, LC3）和Beclin1表達(dá)，了解自噬狀態(tài)。通過免疫組織化學(xué)和Western-blot檢測腎臟和心臟組織的Caspase3表達(dá)及TUNEL法以明確對組織的凋亡程度的影響。
　　結(jié)果：
　　根據(jù)HPLC測定腎臟的去甲腎上腺素水平，以去腎交感神經(jīng)后24小時開始I/R。與I/R組相比，R+I組的肌酐、尿素氮、胱抑素C、血漿NGAL和CK-MB升高（P＜

7、0.05）。腎臟HE染色可見皮髓質(zhì)交界處腎小管細(xì)胞變性、崩解和脫離，管腔擴(kuò)張明顯，腎間質(zhì)水腫。心肌HE染色可見心肌排列紊亂，間隙增寬，可見斷裂。R+I組氧化應(yīng)激增強(qiáng)，腎臟和心臟組織的MDA升高，SOD下降，Nrf2及其下游的HO-1的表達(dá)增強(qiáng)（P＜0.05）。R+I組自噬水平下降，LC3和Beclin1的表達(dá)較I/R組減少，Caspase3的表達(dá)及TUNEL陽性細(xì)胞數(shù)增加（P＜0.05）。我們通過HPLC測定出I/R組和R+I組腎臟及心

8、肌組織的去甲腎上腺素水平相對于Sham組明顯升高，并且R+I組高于I/R組（P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　本研究通過建立去腎交感神經(jīng)大鼠模型，從臟器功能、氧化應(yīng)激狀態(tài)、自噬和凋亡的水平多方面研究了去腎交感神經(jīng)對腎臟缺血再灌注后腎臟和心臟的作用。我們發(fā)現(xiàn)去腎交感神經(jīng)合并腎臟缺血后加重了腎臟缺血再灌注損傷以及遠(yuǎn)隔部位心臟的影響?？紤]原因?yàn)椋海?）通過化學(xué)消融達(dá)到部分去腎交感神經(jīng)的效果不足以抵抗腎臟缺血再灌注所致交感神經(jīng)活性的

9、增強(qiáng)；（2）本研究為確定去腎交感神經(jīng)起效的最佳時機(jī)，測定了去腎交感神經(jīng)24小時、48小時和72小時的去甲腎上腺素水平，擬定了24小時為最佳時機(jī)，但也因此導(dǎo)致去腎交感神經(jīng)+腎臟缺血再灌注出現(xiàn)二次開腹的情況，可能導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷加重進(jìn)一步影響心腎功能。（3）去腎交感神經(jīng)后是否會有殘存的腎交感神經(jīng)，以及其他的代償機(jī)制或全身交感神經(jīng)反饋機(jī)制導(dǎo)致腎臟缺血再灌注后局部和遠(yuǎn)隔器官的損害加重尚不清楚。目前去腎交感神經(jīng)對腎臟缺血再灌注的研究較少，現(xiàn)有的研