Necrostatin-1對大鼠腎缺血再灌注損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的:通過建立大鼠腎缺血再灌注損傷(Ischemia-Reperfusion Injury, IRI)模型，觀察其對大鼠腎病理、生化指標(biāo)、炎癥因子及細(xì)胞程序性壞死的影響，并觀察Necrostatin-1(Nec-1)對腎的保護(hù)作用，探討其可能的機(jī)制，為臨床治療腎缺血再灌注損傷提供理論依據(jù)。
　　方法:將90只雄性SD大鼠按隨機(jī)數(shù)字表法分為3組:假手術(shù)組、DMSO對照組、Nec-1組，每組30只;每組按2h、12h、24h再分為3組

2、，每組10只。DMSO對照組和Nec-1組采用夾閉雙側(cè)大鼠腎動脈45min再恢復(fù)血流的方法制成腎缺血再灌注模型，于模型完成前15min尾靜脈給藥。假手術(shù)組不夾閉雙側(cè)腎動脈。Nec-1組于再灌15min前尾靜脈注射Nec-11mg/kg（由DMSO溶解），DMSO對照組注射等體積DMSO，假手術(shù)組只游離雙腎，不作任何處理。模型成功后收集血清及腎臟組織;檢測血清肌酐(serum creatinine，Scr)、血尿素氮(blood urea

3、nitrogen，BUN);HE染色觀察腎組織病理改變并計算腎小管壞死評分;酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)方法檢測腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)濃度;Western blot方法檢測受體相互作用蛋白1和3(RIP1，RIP3)的表達(dá)。
　　結(jié)果:1.與假手術(shù)組相比，DMSO對照組及Nec-1組大鼠各時間點(diǎn)Scr、BUN水平均升高(

4、P＜0.01)，以DMSO組升高更為明顯。隨著時間推移，兩組Scr、BUN水平均升高，Nec-1組大鼠各時間點(diǎn)Scr、BUN水平比DMSO對照組均降低(P＜0.05)。
　　2.假手術(shù)組大鼠腎組織結(jié)構(gòu)清晰，腎小管上皮細(xì)胞完整，排列整齊。DMSO對照組腎小管結(jié)構(gòu)異常，細(xì)胞脫落壞死、腫脹、管型形成、炎細(xì)胞浸潤明顯。與DMSO對照組相比，Nec-1組細(xì)胞脫落壞死、腫脹、管型形成均減輕，炎細(xì)胞相對減少。與假手術(shù)組相比，DMSO組與Nec-

5、1組大鼠各時間點(diǎn)腎小管壞死評分均明顯升高(P＜0.01)以DMSO組升高更為顯著。隨著時間推移，兩組Scr、BUN水平均升高，Nec-1組大鼠各時間點(diǎn)腎小管壞死評分水平比DMSO對照組均降低(P＜0.05)。
　　3.DMSO對照組及Nec-1組大鼠各時間點(diǎn)TNF-α、IL-1β表達(dá)比假手術(shù)組明顯升高(P＜0.01)，以DMSO組升高更為明顯。隨著時間推移，兩組TNF-α、IL-1β水平均升高，Nec-1組大鼠各時間點(diǎn)TNF-α、

6、IL-1β比DMSO對照組均降低(P＜0.01)。
　　4.假手術(shù)組RIP1和RIP3蛋白的表達(dá)量很低。與假手術(shù)組相比，DMSO對照組及Nec-1組RIP1和RIP3蛋白從2h開始就有較明顯表且的表達(dá)，且隨時間升高(P＜0.01)。隨著時間推移，兩組RIP1和RIP3蛋白水平均升高，與DMSO對照組相比，Nec-1組RIP1和RIP3蛋白的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。
　　結(jié)論:1.腎缺血再灌注損傷可導(dǎo)致大鼠腎組織

7、結(jié)構(gòu)破壞，細(xì)胞脫落壞死，腎小管壞死評分明顯升高，反應(yīng)腎功能水平的Scr、BUN水平均升高。Nec-1能有效減輕腎缺血再灌注損傷，改善腎功能。
　　2.腎缺血再灌注損傷可激活大鼠免疫反應(yīng)，引起TNF-α、IL-1β等炎癥因子明顯升高。Nec-1能有效抑制免疫炎癥反應(yīng)，減輕損傷。
　　3.腎缺血再灌注損傷可引起嚴(yán)重的程序性壞死，RIP1和RIP3蛋白升高明顯。Nec-1能抑制RIP1和RIP3蛋白活性，減輕程序性壞死對腎組織損傷