Cx43在人卵巢顆粒細(xì)胞中的表達(dá)及與體外受精——胚胎移植結(jié)局關(guān)系的研究.pdf

1、背景及目的：
　　 隨著不孕癥發(fā)病率的逐年提高，越來越多的人開始選擇通過人類輔助生殖技術(shù)獲取健康的后代。自從體外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)技術(shù)開展以來，各國從事輔助生殖技術(shù)的研究工作者和臨床醫(yī)師，通過大量的科學(xué)實驗與臨床工作，不斷改進(jìn)技術(shù)，調(diào)整用藥方案，使得體外受精-胚胎移植技術(shù)的成功率得以顯著提高。然而，在進(jìn)行輔助生殖技術(shù)助孕過程中，總有部分患者

2、難以獲取滿意的結(jié)果，其獲卵數(shù)、優(yōu)質(zhì)胚胎數(shù)、妊娠率往往較低。如何安全的獲取高質(zhì)量、高效率的卵母細(xì)胞是目前研究的難點及熱點。
　　 卵泡的發(fā)育和卵母細(xì)胞的成熟過程受到多種因素的調(diào)控。卵母細(xì)胞與其周圍顆粒細(xì)胞及顆粒細(xì)胞與顆粒細(xì)胞之間通過間隙連接蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊進(jìn)行著營養(yǎng)、代謝物質(zhì)的傳遞和信號的傳導(dǎo)。間隙連接蛋白43(Connexin43，Cx43)是卵泡發(fā)育過程中最重要的連接蛋白。目前關(guān)于Cx43在卵泡發(fā)育過程中的作用主要集中于動

3、物方面的研究，在人類方面研究甚少。在人類輔助生殖助孕過程中，有學(xué)者研究卵丘細(xì)胞Cxs表達(dá)量的高低與助孕結(jié)局的關(guān)系，目前結(jié)果尚有爭議。本文旨在研究壁層顆粒細(xì)胞和卵丘細(xì)胞Cx43表達(dá)量的差異，分析其與體外受精-胚胎移植結(jié)局的關(guān)系，判斷其對卵母細(xì)胞質(zhì)量及胚胎發(fā)育潛能的預(yù)測價值。
　　 方法：
　　 收集2012年10月～2013年1月在鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學(xué)中心行IVF-ET助孕治療的患者壁層顆粒細(xì)胞32例，行ICSI助

4、孕患者卵丘細(xì)胞25例。均采用我中心常規(guī)長方案，于月經(jīng)黃體中期降調(diào)節(jié)，在促排過程中動態(tài)監(jiān)測血清E2、P、LH變化及卵泡發(fā)育情況，及時調(diào)整Gn用量，適時注射HCG，36～37h后陰道超聲引導(dǎo)下行穿刺取卵術(shù)。體外授精后培養(yǎng)72h進(jìn)行胚胎移植，同時給予黃體酮、達(dá)芙通進(jìn)行黃體支持治療。胚胎移植后14、18天抽血查血β-HCG，陽性且移植后35天腹部B超宮內(nèi)見孕囊者為臨床妊娠。按妊娠與否分為妊娠組和非妊娠組。應(yīng)用實時熒光定量PCR技術(shù)分別測定壁層顆

5、粒細(xì)胞、卵丘細(xì)胞上Cx43在mRNA水平的表達(dá);應(yīng)用免疫細(xì)胞化學(xué)技術(shù)測定壁層顆粒細(xì)胞上Cx43在蛋白水平的表達(dá)。分別比較妊娠組與非妊娠組其表達(dá)量的差異。采用免疫熒光染色檢測Cx43在壁層顆粒細(xì)胞上的表達(dá)及表達(dá)部位。
　　 結(jié)果：
　　 1.妊娠組壁層顆粒細(xì)胞中Cx43mRNA及蛋白水平表達(dá)均低于非妊娠組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(1.00(0.50，2.08)vs.2.30(1.77，6.90)，P＜0.05;114.72±12

6、.40vs.147.54±18.91,P＜0.05)。
　　 2.妊娠組卵丘細(xì)胞中Cx43mRNA表達(dá)與非妊娠組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(1.68(0.99,3.13)vs.2.34(1.01,3.95),P＞0.05)。
　　 3.壁層顆粒細(xì)胞中Cx43mRNA表達(dá)與受精率、卵裂率負(fù)相關(guān)(r=-0.482，P＜0.05;r=-0.453,P＜0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 Cx43主要在人卵巢壁層顆粒細(xì)