粒細(xì)胞集落刺激因子促進(jìn)骨髓干細(xì)胞心肌細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 通過在同一標(biāo)準(zhǔn)（同一載體和同一實(shí)驗(yàn)條件）下依次檢驗(yàn)1）、干細(xì)胞動(dòng)員劑是否真正起到了刺激骨髓干細(xì)胞分裂增加并釋放入外周血的作用；2）、動(dòng)員后的骨髓干細(xì)胞是否正確的因“歸巢作用”到達(dá)心肌；3)、到達(dá)心肌的經(jīng)骨髓干細(xì)胞橫向分化的細(xì)胞是否真正具有與心肌細(xì)胞相似的功能（即是否真正成為所謂的“心肌樣細(xì)胞”）這一續(xù)貫的過程，證實(shí)應(yīng)用粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)動(dòng)員骨髓干細(xì)胞促使心肌細(xì)胞再生的可行性和有效性。
　　 方

2、法：
　　 選取異丙基腎上腺素(ISO)造模成功的急性心肌缺血SD大鼠20只（以EF值小于60％為標(biāo)準(zhǔn)），隨機(jī)分為動(dòng)員組和對(duì)照組各10只，動(dòng)員組每天同一時(shí)間連續(xù)7天皮下注射G-CSF，對(duì)照組同一時(shí)間皮下注射等量生理鹽水。第5天兩組均腹腔注射5-溴-2＇-脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)，并尾靜脈取血后分離單個(gè)核細(xì)胞，加入抗大鼠CD34+單克隆抗體，流式細(xì)胞儀測外周血CD34+細(xì)胞占單個(gè)核細(xì)胞的比例。第28天檢查超聲心動(dòng)圖，隨后處死兩組

3、大鼠，取出心臟后制成冷凍切片，以兔抗鼠一抗和熒光二抗標(biāo)染切片，觀察熒光顯色的細(xì)胞；以抗BrdU單克隆抗體ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶法）DAB染色，觀察顯色陽性的細(xì)胞。EF值和CD34+細(xì)胞比例以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差((x)±s)表示，組問兩兩比較采用t檢驗(yàn)，用SPSS14.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，以P＜0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)果：
　　 1、動(dòng)員劑（或生理鹽水）皮下注射7天后動(dòng)員組外周血CD34+細(xì)胞占單個(gè)核細(xì)胞

4、的比例(4.350±0.7487)%，顯著高于對(duì)照組(0.330±0.2111)%，組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；
　　 2、實(shí)驗(yàn)第28天心動(dòng)超聲圖檢查顯示動(dòng)員組EF值(74.700±3.0569)%，顯著高于對(duì)照組(65.900±4.0675)%，組間比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；
　　 3、心肌組織切片BrdU免疫熒光染色可見動(dòng)員組均存在相對(duì)密集并且均勻分布的熒光顯色的細(xì)胞，對(duì)照組部分切片存在零星的熒

5、光顯色的細(xì)胞；BrdU-DAB染色可見動(dòng)員組顯色陽性的細(xì)胞排列規(guī)整，具有方向性，可明顯顯示心肌細(xì)胞橫紋和肌小節(jié)結(jié)構(gòu)，陽性細(xì)胞間及與宿主心肌細(xì)胞間有細(xì)胞的突起相連，對(duì)照組部分切片存在零星的顯色陽性的細(xì)胞。
　　 結(jié)論：
　　 1、粒細(xì)胞集落刺激因子能夠極大的動(dòng)員骨髓干細(xì)胞的增殖并排入外周血中；
　　 2、動(dòng)員后的骨髓干細(xì)胞能夠正確的因“歸巢作用”到達(dá)心?。?br>　　 3、受損心肌組織內(nèi)經(jīng)骨髓干細(xì)胞分化而成的細(xì)胞