粒細胞集落刺激因子促進骨髓干細胞心肌細胞分化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 通過在同一標準（同一載體和同一實驗條件）下依次檢驗1）、干細胞動員劑是否真正起到了刺激骨髓干細胞分裂增加并釋放入外周血的作用；2）、動員后的骨髓干細胞是否正確的因“歸巢作用”到達心??；3)、到達心肌的經骨髓干細胞橫向分化的細胞是否真正具有與心肌細胞相似的功能（即是否真正成為所謂的“心肌樣細胞”）這一續(xù)貫的過程，證實應用粒細胞集落刺激因子(G-CSF)動員骨髓干細胞促使心肌細胞再生的可行性和有效性。
　　 方

2、法：
　　 選取異丙基腎上腺素(ISO)造模成功的急性心肌缺血SD大鼠20只（以EF值小于60％為標準），隨機分為動員組和對照組各10只，動員組每天同一時間連續(xù)7天皮下注射G-CSF，對照組同一時間皮下注射等量生理鹽水。第5天兩組均腹腔注射5-溴-2＇-脫氧尿嘧啶核苷(BrdU)，并尾靜脈取血后分離單個核細胞，加入抗大鼠CD34+單克隆抗體，流式細胞儀測外周血CD34+細胞占單個核細胞的比例。第28天檢查超聲心動圖，隨后處死兩組

3、大鼠，取出心臟后制成冷凍切片，以兔抗鼠一抗和熒光二抗標染切片，觀察熒光顯色的細胞；以抗BrdU單克隆抗體ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶法）DAB染色，觀察顯色陽性的細胞。EF值和CD34+細胞比例以均數±標準差((x)±s)表示，組問兩兩比較采用t檢驗，用SPSS14.0軟件進行數據處理，以P＜0.05為有統(tǒng)計學差異。
　　 結果：
　　 1、動員劑（或生理鹽水）皮下注射7天后動員組外周血CD34+細胞占單個核細胞

4、的比例(4.350±0.7487)%，顯著高于對照組(0.330±0.2111)%，組間比較具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)；
　　 2、實驗第28天心動超聲圖檢查顯示動員組EF值(74.700±3.0569)%，顯著高于對照組(65.900±4.0675)%，組間比較具有統(tǒng)計學差異(P＜0.05)；
　　 3、心肌組織切片BrdU免疫熒光染色可見動員組均存在相對密集并且均勻分布的熒光顯色的細胞，對照組部分切片存在零星的熒

5、光顯色的細胞；BrdU-DAB染色可見動員組顯色陽性的細胞排列規(guī)整，具有方向性，可明顯顯示心肌細胞橫紋和肌小節(jié)結構，陽性細胞間及與宿主心肌細胞間有細胞的突起相連，對照組部分切片存在零星的顯色陽性的細胞。
　　 結論：
　　 1、粒細胞集落刺激因子能夠極大的動員骨髓干細胞的增殖并排入外周血中；
　　 2、動員后的骨髓干細胞能夠正確的因“歸巢作用”到達心??；
　　 3、受損心肌組織內經骨髓干細胞分化而成的細胞