缺血后適應(yīng)聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子治療急性心肌梗死的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、急性心肌梗死(AMI)是現(xiàn)今危害人們生命健康的主要?dú)⑹郑皶r(shí)的心臟血運(yùn)重建、有效地減少梗死心肌的面積是治療的關(guān)鍵。再灌注損傷的存在減少了積極血運(yùn)重建的益處，缺血后適應(yīng)(IP)可以顯著地減少再灌注損傷，縮小梗死面積。粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)可以通過(guò)促進(jìn)干細(xì)胞向梗死心肌歸巢，促進(jìn)心肌、血管新生等，從而改善心功能和防止左室重塑，但目前臨床應(yīng)用的結(jié)果不盡人意。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)先以缺血后適應(yīng)方法減輕心肌再灌注損傷，改善梗死心肌局部微環(huán)境；同時(shí)聯(lián)

2、用G-CSF皮下注射，增加骨髓干細(xì)胞釋放，從而利于更多的干細(xì)胞歸巢到梗死局部，增加病變處心肌修復(fù)、再生能力，以期能更好地減少心肌損傷、減輕心室重構(gòu)，從而改善心肌梗死的預(yù)后。
　　 第一部分急性心肌梗死缺血再灌注實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型的建立
　　 目的：建立穩(wěn)定可靠、標(biāo)準(zhǔn)化程度高的急性心肌梗死缺血再灌注的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型。
　　 方法：1、選用新西蘭大白兔，隨機(jī)分為兩組(每組10只)。2、“六線六結(jié)”法開胸后，“雙線雙結(jié)”法分別

3、結(jié)扎左前降支(A組)或左室支(B組)30min后，實(shí)施再灌注2小時(shí)。3、手術(shù)前后抽股靜脈血檢測(cè)cTnI。4、再灌注結(jié)束后取出心臟，TTC染色后比較兩組心肌梗死面積。
　　 結(jié)果：1、“六線六結(jié)”法開胸建模術(shù)中，出血、氣胸的發(fā)生率明顯低于傳統(tǒng)方法，兩組制模成功率均為70％。2、術(shù)中持續(xù)心電圖Ⅱ?qū)?lián)監(jiān)護(hù)顯示，50％的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物結(jié)扎左室支后，未見典型的ST段抬高。3、兩組手術(shù)后肌鈣蛋白I(ng/ml)較術(shù)前均明顯升高(A組：0.37±0

4、.12 vs.2.31±1.59，P<0.05：B組：0.32±0.14 vs.3.49±0.74，P<0.01)，B組升高更明顯，且較一致，但組間差異不明顯(p=0.061)。4、左室支結(jié)扎組的梗死心肌面積(％)明顯大于結(jié)扎左前降支組，且變異小(A組：21.51±7.87％，B組：28.95±6.59％，p<0.05)。
　　 結(jié)論：1、“六線六結(jié)”開胸法可以有效地減少出血及氣胸的發(fā)生率，提高制模成功率。2、結(jié)扎左室支復(fù)制兔急

5、性心肌梗塞模型造成的心梗范圍較大且穩(wěn)定，優(yōu)于常規(guī)前降支結(jié)扎法。3、以監(jiān)護(hù)心電圖Ⅱ?qū)?lián)ST段抬高作為判定結(jié)扎冠脈成功與否，有一定的局限性。
　　 第二部分缺血后適應(yīng)聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物急性心肌梗死的心臟保護(hù)作用研究
　　 目的：主要研究：1、IP、G-CSF單用的直接心臟保護(hù)作用，防治心室重構(gòu)以及改善心功能的作用。2、IP聯(lián)合G-CSF對(duì)急性心肌梗死的心臟保護(hù)作用。3、IP、G-CSF以及聯(lián)合應(yīng)用對(duì)心肌缺血再灌

6、注保護(hù)作用的異同。4、IP聯(lián)合G-CSF對(duì)急性心肌梗死的心臟保護(hù)作用的可能機(jī)制。
　　 方法：1、結(jié)扎左室支缺血30min后，隨機(jī)將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物新西蘭大白兔分為4組(每組15只)，即：缺血再灌注對(duì)照組(IR組)心肌缺血30min后直接再灌注；粒細(xì)胞集落刺激因子組(G-CSF組)心肌缺血30min后直接再灌注，并于術(shù)后12h開始使用G-CSF(10μg/kg，皮下注射，Qd×5)；缺血后適應(yīng)組(IP組)心肌缺血30min后，予以IP(

7、30s×30s×4)改良再灌注；粒細(xì)胞集落刺激因子+缺血后適應(yīng)組(G-CSF+IP組)缺血完成后，聯(lián)合應(yīng)用IP及G-CSF干預(yù)。2、記錄各組再灌注時(shí)心律、ST等改變。3、各組手術(shù)前及術(shù)后1w抽血，檢測(cè)血常規(guī)、肌鈣蛋白I。4、術(shù)后4w后行超聲心動(dòng)圖檢查。5、完成心超檢查后取出心臟，TTC染色測(cè)定各組心肌梗死的面積，HE染色、透射電子顯微鏡，觀察組織病理結(jié)構(gòu)。6、TUNEL法檢測(cè)梗死周邊心肌細(xì)胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：1、與IR對(duì)照

8、組及G-CSF組相比，采用IP優(yōu)化再灌注的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物組，再灌注期間ST段回落明顯加快，差異有顯著性(P<0.05)，心律失常的發(fā)生率也明顯少于常規(guī)再灌注組。2、G-CSF處理后WBC(×109)較用藥前明顯升高，分別為：IR組5.4±3.8，G-CSF組13.8±12.9*，IP組8.5±5.6，IP+G-CSF組12.3±6.7*(*p<0.05 vs.同組術(shù)前)。3、術(shù)后1w血漿肌鈣蛋白I濃度(ng/ml)分別為：IR組3.34±2.

9、21，G-CSF組1.62±1.65*，IP組1.69±1.70*，IP+G-CSF組1.54±1.02*(*p<0.05 vs.IR組)。4、心超LVEF檢測(cè)(％)分別為：IR組58.2±7.5，G-CSF組62.21±9.3*&，IP組61.3±8.7*&，IP+G-CSF組70.9±9.8**(*P<0.05 vs.RI組，**P<0.01 vs.RI組，&P<0.05 vs.G-CSF+IP組)。5、梗死心肌面積(％)分別為：I

10、R組31.37±12.18，G-CSF組19.56±7.39*，IP組18.27±4.76*，IP+G-CSF組16.42±6.03*(*P<0.05 vs.IR組)。6、組織病理學(xué)分析，IP改進(jìn)再灌注組與G-CSF治療組，梗死周邊區(qū)心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)異常改變、局部炎癥反應(yīng)、組織纖維化程度較對(duì)照組減輕，聯(lián)合治療組最優(yōu)。微血管計(jì)數(shù)(個(gè)/0.1mm2)分別為：IR組1.12±2.21，G-CSF組3.82±1.75*，IP組2.1±1.49，

11、IP+G-CSF組4.1+2.01**&(*P<0.05 vs.RI組，**P<0.01 vs.RI組，&P<0.05 vs.IP組)。7、TUNEL法心肌凋亡指數(shù)(％)檢測(cè)顯示：IR組32±4，G-CSF組16±2*，IP組17±2*，IP+G-CSF組15±1**(*P<0.05 vs.IR組**P<0.01 vs.RI組)。8、聯(lián)合組及其他組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中，均未發(fā)現(xiàn)明顯的不良反應(yīng)。
　　 結(jié)論：1、缺血后適應(yīng)能顯著減少再灌注損

12、傷，縮小心肌梗死的面積、減輕細(xì)胞凋亡的程度，保護(hù)心功能。2、粒細(xì)胞集落刺激因子可使心肌梗死面積、細(xì)胞凋亡程度均顯著降低，促進(jìn)梗死心肌周邊微血管的新生等，有效防治心室重構(gòu)。3、缺血后適應(yīng)改良再灌注與G-CSF藥物治療的心臟保護(hù)作用相近。4、采用缺血后適應(yīng)改良再灌注聯(lián)合粒細(xì)胞集落刺激因子進(jìn)行藥物干預(yù)后，通過(guò)減輕再灌注損傷、減少細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管新生等機(jī)制而發(fā)揮心臟保護(hù)作用，與IP、G-CSF單用相比，有更優(yōu)的趨勢(shì)。5、缺血后適應(yīng)聯(lián)合粒細(xì)胞集