通絡(luò)方劑治療糖尿病肝損害的療效及其可能機(jī)制.pdf

1、研究背景及目的:
　　 越來(lái)越多的研究顯示糖尿病及其并發(fā)癥與氧化應(yīng)激之間有緊密的聯(lián)系。糖尿病慢性并發(fā)癥發(fā)病的統(tǒng)一機(jī)制學(xué)說(shuō)認(rèn)為：多元醇通路激活、蛋白質(zhì)非酶糖化增加、蛋白激酶C激活、己糖胺途徑激活等4條引起糖尿病各并發(fā)癥的共同通路實(shí)質(zhì)上都是高糖誘導(dǎo)的超氧化物過(guò)表達(dá)的結(jié)果。糖尿病肝損害是指糖尿病引起的肝臟功能和組織學(xué)變化的病變，屬于糖尿病慢性并發(fā)癥范疇。氧化應(yīng)激與脂質(zhì)過(guò)氧化增強(qiáng)時(shí)，不僅可以直接損傷肝細(xì)胞、誘導(dǎo)炎癥細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的趨化產(chǎn)生炎

2、癥浸潤(rùn)，還能激活肝貯脂細(xì)胞(星形細(xì)胞)促進(jìn)膠原纖維合成，導(dǎo)致纖維化甚至肝硬化?？寡趸瘎┛蓽p少自由基的產(chǎn)生或直接淬滅機(jī)體產(chǎn)生的自由基，增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力。因此，采用抗氧化劑治療糖尿病以改善機(jī)體異常的病理生理狀況，成為現(xiàn)今治療糖尿病及其并發(fā)癥的重要方法之一。多種抗氧化劑如維生素C、E和α-硫辛酸等可對(duì)糖尿病并發(fā)癥產(chǎn)生有益的影響。通絡(luò)方劑(Tongluo Recipe，TLR)是中藥復(fù)方制劑，由人參、水蛭、蜈蚣、全蝎、土鱉蟲和赤芍等組成?，F(xiàn)

3、代藥理研究表明，人參的主要活性成分人參皂甙具有降血脂，抗氧化，抗凋亡作用；水蛭有利尿、消除尿蛋白的作用，并能改善微循環(huán)；土鱉蟲和全蝎具有抗凝、抗血栓形成的作用；赤芍具有降低全血濃度、抑制血小板聚集，降低血小板動(dòng)附性，降低纖維蛋白原，限制血栓形成時(shí)間等作用。本課題前期研究表明通絡(luò)方劑能通過(guò)其抗氧化和改善血流動(dòng)力學(xué)等作用減輕糖尿病大鼠并發(fā)的腎臟、血管內(nèi)皮、心肌細(xì)胞、腦海馬組織等的損傷。通絡(luò)方劑是否對(duì)糖尿病肝損害具有治療作用，目前尚無(wú)相關(guān)報(bào)道

4、。本實(shí)驗(yàn)使用鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)制備糖尿病大鼠模型，觀察其對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病鼠血清肝功能、肝纖維化相關(guān)指標(biāo)，肝組織氧化應(yīng)激及肝臟形態(tài)學(xué)改變的影響，旨在探討通絡(luò)方劑對(duì)糖尿病肝損害的療效及其可能機(jī)制。
　　 研究對(duì)象及方法:
　　 以SD大鼠為研究對(duì)象，予鏈脲佐菌素60 mg/kg一次性腹腔注射，1周后測(cè)血糖≥16.7mmol/L為糖尿病模型制備成功。將糖尿病模型鼠以隨機(jī)數(shù)字表法分為4組(每組10只

5、)：(1)糖尿病對(duì)照組(DM)；(2)通絡(luò)方劑小劑量組[TL，TLR劑量為0.5g/(kg·d)]；(3)通絡(luò)方劑中等劑量組[TM，TLR劑量為1.0g/(kg·d)]；(4)通絡(luò)方劑大劑量組[TH，TLR劑量為2.0g/(kg·d)]。同時(shí)取10只大鼠作為正常對(duì)照組(CN)。實(shí)驗(yàn)周期為12周。
　　 1.檢測(cè)各組大鼠體質(zhì)量、血糖、血脂[甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)]
　　 2.檢測(cè)血清肝功能指標(biāo)[丙氨酸轉(zhuǎn)氨

6、酶(ALT)、天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(AKP)]，血清肝纖維化指標(biāo)[透明質(zhì)酸(HA)、Ⅳ型膠原(Ⅳ-c)、層粘連蛋白(LN)、Ⅲ型前膠原(PCIII)]
　　 3.光鏡及透射電鏡觀察肝組織形態(tài)學(xué)改變。
　　 4.檢測(cè)肝組織氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)[超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-PX)、丙二醛(MDA)]
　　 結(jié)果：
　　 1.糖尿病大鼠血糖及血清三酰甘

7、油顯著升高(P＜0.01)，體質(zhì)量和血清高密度脂蛋白顯著降低(P＜0.01)。經(jīng)通絡(luò)方劑治療12周后，中高劑量組糖尿病大鼠體質(zhì)量較未治療鼠有所增加，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；糖尿病大鼠的血糖、血脂指標(biāo)在通絡(luò)方劑治療后未見(jiàn)到明顯改變。
　　 2.糖尿病大鼠并發(fā)肝臟損傷，血清肝功能指標(biāo)ALT、AST及AKP水平均顯著升高(P＜0.01)。經(jīng)通絡(luò)方劑治療12周后，中高劑量組糖尿病大鼠血清ALT、AST水平明顯下降(P＜0.05)，肝損傷得到一

8、定程度的改善。
　　 3.糖尿病大鼠血清肝纖維化指標(biāo)HA及Ⅳ-c水平顯著升高(P＜0.01)。經(jīng)通絡(luò)方劑治療12周后，高劑量組糖尿病大鼠血清肝纖維化指標(biāo)HA及Ⅳ-c水平明顯下降(P＜0.05)。
　　 4.光鏡及透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，糖尿病大鼠肝細(xì)胞出現(xiàn)明顯的糖尿病特征性病理變化：胞質(zhì)糖原顆粒明顯增多，胞質(zhì)內(nèi)脂滴增多，肝細(xì)胞線粒體嵴模糊且基質(zhì)變密，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)局部脫顆粒、滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)大。同時(shí)，糖尿病大鼠出現(xiàn)肝臟纖維化和微血管損

9、傷的病理變化：肝血竇邊緣及肝匯管區(qū)膠原纖維增生，匯管區(qū)血管內(nèi)皮細(xì)胞線粒體腫脹、嵴缺失，部分血管壁增厚，Disse間隙肝貯脂細(xì)胞增生。經(jīng)通絡(luò)方劑干預(yù)12周后，糖尿病大鼠肝細(xì)胞胞質(zhì)糖原顆粒明顯減少，線粒體嵴變清晰且基質(zhì)密度降低，粗面及滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)形態(tài)接近正常。糖尿病大鼠肝血竇邊緣及肝匯管區(qū)膠原纖維增生減輕，匯管區(qū)血管內(nèi)皮細(xì)胞形態(tài)及血管壁厚度接近正常，Disse間隙肝貯脂細(xì)胞增生減輕。通絡(luò)方劑治療使上述病理形態(tài)得到明顯改善。
　　 5.

10、糖尿病大鼠肝組織抗氧化酶SOD、CAT活性均顯著降低(P＜0.01)；GSH-Px水平也有所下降，但差異沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MDA水平顯著升高(P＜0.01)，肝組織處于過(guò)度氧化應(yīng)激狀態(tài)。經(jīng)通絡(luò)方劑治療12周后，低中高劑量組糖尿病大鼠肝組織SOD活性均顯著增加(P＜0.01)；中高劑量組糖尿病大鼠肝組織MDA水平顯著下降(P＜0.01)，肝組織的氧化應(yīng)激水平有所下降。
　　 結(jié)論：
　　 1.糖尿病大鼠血清肝功能及肝纖維化指

11、標(biāo)升高，同時(shí)出現(xiàn)糖尿病特征性肝臟形態(tài)學(xué)改變。通絡(luò)方劑治療可顯著降低上述血生化指標(biāo)異常、明顯改善肝臟病理形態(tài)，對(duì)糖尿病肝損害具有一定的治療作用，其治療劑量為2.0g/(kg·d)時(shí)療效顯著。
　　 2.糖尿病大鼠肝組織氧化應(yīng)激水平增高，通絡(luò)方劑可增強(qiáng)肝組織抗氧化酶類活性、清除脂質(zhì)過(guò)氧化物，降低肝組織氧化應(yīng)激水平。
　　 3.糖尿病大鼠糖脂代謝紊亂明顯，通絡(luò)方劑治療未見(jiàn)明顯降血糖、血脂作用。故分析通絡(luò)方劑對(duì)糖尿病肝損害的治療