N-乙酰半胱氨酸對ARDS肺纖維化的抑制.pdf

1、急性呼吸窘迫綜合征(Acuterespiratorydistresssyndrome，ARDS)是急性肺損傷(Acutelunginjury，ALI)最嚴重的階段，是在肺內外一系列嚴重疾病影響下，發(fā)生的以肺泡毛細血管損傷為主要表現(xiàn)的臨床綜合征。ARDS是一個動態(tài)的疾病，可迅速進展至具有不同臨床病理生理特征、不同治療需要的幾個階段。ARDS晚期間質纖維增殖異常，若未被抑制，將進展為纖維變性的肺損傷，間質細胞及其產物沿著新生血管的管壁充滿肺

2、泡腔。組織學分析發(fā)現(xiàn)，伴隨著成纖維細胞聚積，它們在空腔、間質、呼吸性細支氣管和腺泡內微血管壁產生大量結締組織產物，形成纖維化肺泡炎。纖維化肺泡炎與死亡率的增加相關，因此而死亡的患者尸檢發(fā)現(xiàn)肺部有膠原和纖維結合素的顯著累積。研究表明，纖維增殖異常是15％～40％的ARDS未存活患者的主要致死原因，而且還是其余未存活患者發(fā)生致命性膿毒血癥及相關多器官功能衰竭的促發(fā)因素，肺纖維化成為影響ARDS患者搶救成功率及預后的主要因素，因此，關于肺纖維

3、化形成機制及有效干預治療的研究非常重要。 目前，糖皮質激素為治療ARDS肺纖維化的唯一手段。但是，由于糖皮質激素可引起多種副作用，特別是其對機體炎癥和防御反應的廣泛抑制，造成機體對多種病原體的易感性，可誘發(fā)或加重感染的發(fā)生。然而，ARDS患者常常存在嚴重感染，感染不僅是ARDS的誘因，而且是ARDS常見的并發(fā)癥。ARDS病程超過7天時，幾乎100％的患者合并感染。這就在很大程度上限制了糖皮質激素在ARDS肺纖維化患者中的應用。因

4、此，有必要尋求一種更為安全有效的防治ARDS肺纖維化的措施。 本課題從ARDS肺纖維化的發(fā)生機理出發(fā)，力圖在細胞水平探究抑制氧自由基損傷對ARDS肺纖維化的阻斷作用，以尋求新的防治ARDS肺纖維化的有效途徑。 目的從細胞水平研究脂多糖所致氧自由基損傷對肺纖維化形成的影響，觀察抗氧化劑N-乙酰半胱氨酸(NAC)對氧自由基損傷以及ARDS肺纖維化的影響，比較N-乙酰半胱氨酸與地塞米松(DEX)二者的作用有無差異。 研

5、究方法膠原含量是肺纖維化程度的重要指標。肺內膠原85％由肺成纖維細胞產生，因此本實驗以體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細胞做為研究對象，將其分為四組，依次為：空白對照組；脂多糖處理組，用于模擬ARDS的細胞模型，觀察脂多糖對ARDS肺纖維化的影響；N-乙酰半胱氨酸加脂多糖處理組，觀察N-乙酰半胱氨酸對脂多糖所致肺纖維化的影響；地塞米松加脂多糖組，做為治療對照組，觀察地塞米松對脂多糖所致肺纖維化的影響，并比較N-乙酰半胱氨酸與地塞米松二者的作用有無

6、差異。 四組細胞體外培養(yǎng)約24小時后，提取細胞內總蛋白，使用考馬斯亮蘭法測定細胞內總蛋白含量，Sircol膠原測定試劑盒測定細胞內膠原蛋白含量，根據(jù)細胞內膠原蛋白含量在細胞內總蛋白含量中比例的變化，比較幾種處理因素對肺纖維化的影響。 為進一步明確幾種處理因素影響肺纖維化的機理，使用還原型谷胱甘肽測定(γ-glutamylcysteinylglycine，GSH)試劑盒測定細胞內GSH含量的變化——GSH含量變化是細胞氧自

7、由基損傷程度的重要指標。根據(jù)細胞內GSH含量在細胞內總蛋白含量中比例的變化，比較幾種處理因素對肺成纖維細胞氧自由基損傷的影響，從而明確氧自由基損傷在ARDS肺纖維化發(fā)病過程中所起的作用。 統(tǒng)計學分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準誤表示，樣本均數(shù)的差異顯著性檢驗使用方差分析，P＞0.05表示無顯著性差異，P＜0.05表示有顯著性差異。 結果1.與空白對照組相比，LPS可明顯誘導肺成纖維細胞產生膠原(P=0.022)及細胞內GSH含量減

8、少(P=0.011)。 2.NAC明顯抑制LPS所誘導的肺成纖維細胞膠原產生(P=0.012)以及細胞內GSH含量減少(P=0.008)。 3.DEX明顯抑制LPS所誘導的肺成纖維細胞膠原產生(P=0.041)以及細胞內GSH含量減少(P=0.028)。 4.NAC與DEX在抑制LPS所誘導的肺成纖維細胞膠原產生(P=0.563)以及細胞內GSH含量減少(P=0.540)方面的作用無顯著差異。 結論1.脂