N-乙酰半胱氨酸調(diào)控抑制Notch3信號(hào)通路及其在腫瘤中的作用.pdf

1、N-乙酰半胱氨酸(NAC)作為巰基供給體，是一種抗氧化劑。NAC作為抗氧化劑可以抑制惡性腫瘤的發(fā)展，而降低Notch3信號(hào)通路的活性亦可以抑制惡性腫瘤的發(fā)展。但是，到目前為止，還沒(méi)有有關(guān)NAC與Notch3活性相關(guān)的文獻(xiàn)。在本研究中，旨在探討NAC對(duì)Notch3受體蛋白表達(dá)的影響，NAC對(duì)Notch3信號(hào)通路的下游基因的表達(dá)的影響，以及NAC對(duì)Notch3信號(hào)通路的調(diào)控作用對(duì)腫瘤細(xì)胞表型的影響。
　　 為研究NAC對(duì)Notch3

2、信號(hào)通路的調(diào)控作用，本研究采用不同濃度的NAC(0 mM，2mM，5mM，10 mM)處理HeLa細(xì)胞(0h，0.5 h，1h，3h，6h，12h，24 h)。收集樣本，采用免疫印跡(westernblot analysis)、熒光定量PCR、報(bào)告基因（Hes1-reporter）的方法檢測(cè)NAC對(duì)Notch1和Notch3受體蛋白表達(dá)的影響以及Notch信號(hào)通路的下游基因Hes1和HRT1表達(dá)的影響。為探討NAC對(duì)Notch3信號(hào)通路

3、的調(diào)節(jié)機(jī)制，采用γ-secretase的抑制劑DAPT和Catalase處理細(xì)胞，或?qū)3IC質(zhì)粒轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，然后用免疫印跡檢測(cè)Notch3或其胞內(nèi)活性區(qū)域蛋白的表達(dá)水平。另外，為研究NAC對(duì)Notch3信號(hào)通路的作用對(duì)HeLa細(xì)胞表型的影響，本研究分別采用臺(tái)盼藍(lán)染色法、Wound Healing和Transwell的方法檢測(cè)腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和浸潤(rùn)的影響。
　　 在本研究中，通過(guò)以上的實(shí)驗(yàn)方法，得到如下結(jié)果:NAC在時(shí)間和濃

4、度效應(yīng)方面都顯著抑制了Notch3受體蛋白的表達(dá)，但是對(duì)Notch1受體蛋白的表達(dá)沒(méi)有明顯的影響。Notch3信號(hào)通路的下游基因Hes1和HRT1，在NAC的作用下，其表達(dá)水平也顯著降低。HeLa細(xì)胞的增殖、遷移以及浸潤(rùn)在NAC的作用下有著顯著的減弱，而且，外源性的N3IC可以挽救50％的NAC導(dǎo)致的腫瘤細(xì)胞增殖和遷移抑制效果。但是對(duì)腫瘤細(xì)胞的浸潤(rùn)，外源性的N3IC似乎并沒(méi)用明顯的挽救作用。
　　 綜上所述，在本研究中，首次發(fā)現(xiàn)

5、了NAC可抑制Notch3受體蛋白的表達(dá)，但是對(duì)Notch1受體蛋白的表達(dá)卻沒(méi)有任何影響。而且，NAC并不是作為抗氧化劑，來(lái)對(duì)Notch3信號(hào)通路活性起抑制作用的。另外，NAC的作用位點(diǎn)是在Notch3受體的胞外區(qū)域或者是跨膜區(qū)域。還進(jìn)一步研究了NAC對(duì)Notch3信號(hào)通路的調(diào)節(jié)抑制作用對(duì)宮頸癌HeLa細(xì)胞的增殖、遷移以及浸潤(rùn)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，NAC通過(guò)抑制Notch3信號(hào)通路的活性，從而抑制惡性腫瘤細(xì)胞的增殖以及遷移?？赡懿糠滞ㄟ^(guò)抑制