芍藥苷對(duì)酸敏感離子通道介導(dǎo)的a-synuclein的自噬性降解的調(diào)控作用.pdf

1、目的：
　　 觀察酸敏感離子通道(Acid-sensing ion channels，ASICs)在α-synuclein自噬性降解中的調(diào)控作用，并探討芍藥苷(PF)對(duì)α-synuclein自噬性降解過程的干預(yù)作用及PF對(duì)MPP+誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　 方法：
　　 第一部分：以PC12細(xì)胞為研究對(duì)象，通過單細(xì)胞膜片鉗技術(shù)，Real-time PCR和免疫印跡技術(shù)，熒光免疫標(biāo)記ASICs蛋白，分析A

2、SICs各亞基在PC12細(xì)胞上的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)水平的變化，并分析ASICs非特異性抑制劑阿米洛利(Ami)，ASIC1a特異性拮抗劑狼蛛毒素(PcTx1)以及芍藥苷(PF)對(duì)ASICs通道功能的調(diào)控作用。
　　 第二部分：以PC12細(xì)胞為研究對(duì)象，通過pH6.0酸性培養(yǎng)液及MPP+誘導(dǎo)細(xì)胞損傷，通過免疫印跡技術(shù)檢測(cè)自噬標(biāo)記蛋白LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ，α-synuclein蛋白的表達(dá)，MTT檢測(cè)細(xì)胞增殖，探討ASICs的異常激活對(duì)自噬

3、通路的影響，以及對(duì)α-synuclein自噬性降解過程的影響。同時(shí)，研究芍藥苷對(duì)α-synuclein自噬性降解過程的干預(yù)作用及其對(duì)MPP+誘導(dǎo)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 第一部分：在PC12細(xì)胞上存在有ASIC家族的ASIC1a，ASIC1b，ASIC2a，ASIC2b，ASIC3，ASIC4共6個(gè)亞基的表達(dá)。其中Ami和ASIC1a特異性拮抗劑PcTx1能阻斷PC12細(xì)胞上由酸誘發(fā)的電流，并存在濃

4、度依賴性；類似地，芍藥苷也以濃度依賴性的阻斷ASICs電流。這提示了ASICs可能是芍藥苷的一個(gè)作用靶點(diǎn)。
　　 第二部分：pH6.0酸性培養(yǎng)液及MPP+誘導(dǎo)了細(xì)胞損傷，而Ami及PF預(yù)處理均能減輕細(xì)胞損傷，發(fā)揮保護(hù)作用。而且，pH6.0酸性培養(yǎng)液及MPP+處理細(xì)胞24h后減少了自噬蛋白LC3-Ⅱ的表達(dá)。同時(shí)，pH6.0酸性培養(yǎng)液及MPP+處理細(xì)胞24h后α-synuclein蛋白的表達(dá)顯著上調(diào)，而Ami及PF預(yù)處理均不僅增加L

5、C3-Ⅱ蛋白的表達(dá)，而且降低α-synuclein蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)論：
　　 在PC12細(xì)胞中，存在有ASICs家族六個(gè)亞基的表達(dá)，酸誘導(dǎo)后能產(chǎn)生電流，Ami、PcTx1及PF能阻斷電流。ASICs異常激活后下調(diào)了自噬活性而抑制了α-synuclein蛋白的自噬性降解過程，從而使α-synuclein蛋白表達(dá)增加。而且，Ami及PF能減輕酸處理及MPP+所誘發(fā)的自噬活性的下降、α-synuclein蛋白的表達(dá)上調(diào)及緩